Mikä on verikoe ELISA: lle

Nykyaikaisen lääketieteen kehitys diagnostiikan maailmassa ei lakkaa hämmästyttämästä saavutuksistaan, ja nyt lääkärin ei tarvitse tehdä oletuksia todennäköisestä diagnoosista luottaen vain epäsuoriin oireisiin. Entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen (ELISA) luominen ja käyttöönotto laboratoriotutkimusten avulla antaa sinun nopeasti ja tarkasti määrittää paitsi patogeenin läsnäolon lisäksi myös monet muut taudin ominaisuudet.

IFA: n perustamisen ja kehittämisen historia

Tätä verikokeen testausmenetelmää aloitettiin käytännössä lääketieteessä viime vuosisadan puolivälissä - jossain 60-luvulla. Sen lähtökohtana oli tieteellinen tutkimus histologian alalla, joka rajoittui biologisten lajien soluantigeenisen rakenteen etsimiseen ja tutkimukseen. ELISA-verikoe perustuu sukulaisten antigeenien (AH) ja spesifisten vasta-aineiden (AT) vuorovaikutukseen entsyymin määrittelemän antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostuessa.

Tällainen ilmiö sai tutkijat päättämään, että menetelmää voidaan käyttää tunnistamaan veren seerumissa muodostuneita erityyppisiä proteiiniyhdisteitä, kun patogeeni saapuu kehoon. Koska näitä yhdisteitä on suoraan mukana immuunijärjestelmän toiminnassa, näitä yhdisteitä kutsutaan immunoglobulineiksi (IG, Ig), ja löytö oli suurin läpimurto laboratoriodiagnostiikassa..

Samaan aikaan he alkoivat aktiivisesti käyttää tätä erittäin herkkää menetelmää vasta 80-luvulla, ja se oli saatavana vain hyvin erikoistuneissa lääketieteellisissä laitoksissa. Ensimmäiset, jotka saivat mahdollisuuden käyttää entsyymi-immunomääritysanalysaattoreita, olivat asemat ja verensiirtokeskukset, venereologiset ja tarttuvat lääketieteelliset laitokset. Tämä johtui "XX vuosisadan ruton" - aidsin nopeasta leviämisestä, ja diagnostisten ja terapeuttisten toimenpiteiden kiireellinen käyttöönotto oli tarpeen..

Menetelmäominaisuudet

ELISA-verikokeen laajuus on melko laaja - tällä hetkellä on mahdotonta kuvitella, kuinka monimutkainen monien sairauksien syiden etsiminen olisi. Tällaista tutkimusta sovelletaan nyt melkein kaikilla lääketieteen aloilla, jopa onkologiassa. Vaikka tietämättömien on vaikea ymmärtää, joissakin tapauksissa sen suoritettuaan oli mahdollista pelastaa potilaiden henki havaitsemalla kasvain varhaisvaiheissa.

Nykyaikaisissa diagnostisissa keskuksissa laboratoriotutkimukset eivät ole vain tuumorimarkkereiden esittämiä - ne on varustettu vaikuttavalla paneelien arsenaalilla tätä diagnoosia varten. Niiden avulla voit tunnistaa monia patologisia tiloja, kuten hormonaalisia poikkeavuuksia ja eri alkuperää olevia tarttuvia prosesseja..

Lisäksi ELISA-verikokeen suorittaminen ja dekoodaus mahdollistavat lääkkeiden vaikutuksen seuraamisen sairaan ja jopa eläimen kehoon. Jälkimmäistä käytetään laajalti eläinlääketieteellisillä klinikoilla, sillä se auttaa ylläpitämään lemmikkiemme tai ruuan tarjoajien terveyttä ja varmistaa vakaan lihan, maitotuotteiden ja korvaamattomien munien tarjonnan ruokavaliossa.

Joten vain muutaman millilitran laskimoveren keräämisen ja ELISA-diagnoosin perusteella lääkäri, joka on kuvannut tutkimusaineistot, pystyy määrittämään:

  • hormonaalinen tila, mukaan lukien sukupuolielinten ja kilpirauhanen sekä lisämunuaisen biologisesti aktiiviset aineet;
  • bakteeri- ja virusinfektioiden (hepatiitti B ja C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkuloosi, myko- ja ureaplasmoosi, HIV, TORCH) ja muiden tämän tyyppisten sairauksien esiintyminen;
  • patologisen prosessin patogeenien elintärkeän toiminnan merkit, jotka huipentuivat toipumiseen ja siirtyivät vasta-aineiden muodostumisen vaiheeseen (immuunivaste).

Immuunisolut tunnistavat sellaiset kompleksit paljon helpommin. Vasta-aineiden muodossa olevat jäännösvaikutukset pidetään monissa tapauksissa veressä koko elämän ajan, mikä vähentää käytännössä uudelleeninfektioriskin nollaan..

Immunoglobuliinityypit

Vasta-aineita on useita tyyppejä, joista kukin on mukana immuunivasteen prosessissa tietyssä vaiheessa. Esimerkiksi luokan M immunoglobuliinit (IgM) ovat ensimmäiset, jotka vastaavat AH: n pääsyyn kehoon. Niiden korkeimmat määrät havaitaan taudin alkuaikoina.

Sitten immuunijärjestelmä käynnistää luokan G IG (IgG) plasmaan, joka vastaa antigeenien täydellisestä tuhoamisesta ja potilaan toipumisesta. Myöhemmin ne ovat edelleen veressä, valmistaen siten immuunijärjestelmää toistuvalle altistumiselle identtiselle patogeenille. Tämän periaatteen mukaan rokotus toimii. Kun patologisten mikro-organismien heikennettyjä antigeenejä tuodaan esiin, paljon immunoglobuliineja ilmestyy ja ne kiertävät plasmassa.

Ja myöhemmin, jos patogeeninen kontakti tapahtuu, he selviävät nopeasti tartunnasta ja pelastavat kehon terveysuhkilta. Suuria määriä IgA: ta on keskittynyt limakalvoihin, mikä estää patogeenisten virusten ja bakteerien pääsyn kehoon. IgE: t ovat vastuussa loistartuntojen tappamisesta, ja immuunivasteeseen liittyy monia muita immunoglobuliineja..

Tärkeimmät kiinnostavat kohteet laboratoriodiagnostiikassa ovat Ig-luokat M, G ja A. Pitoisuutensa mukaan voit määrittää taudin vaiheen ja selvittää, mitä tartuntatauteja henkilöllä on ollut elämässään. Voit esimerkiksi tarkistaa vesirokko- tai vihurirokkohistoriaa. Lääkärin ei tarvitse määrätä useita laboratoriotutkimuksia, jotta voidaan selvittää, onko potilaan kehossa tietynlainen AT- tai AH-tyyppi vai jonkin hormonin pitoisuus, vaan riittää, että kirjoitetaan lähetys ELISA-testiä varten..

Metodologian ydin

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys loisille ja muille kehon terveydelle haitallisille mikro-organismeille mahdollistaa patogeenien läsnäolon havaitsemisen ja kertoo myös niiden runsaudesta potilaan veriplasmassa. Siksi tällainen tutkimus mahdollistaa seerumin materiaalista löytyvien patogeenisten mikro-organismien sekä kvalitatiivisen että kvantitatiivisen analyysin..

Patogeenin pitoisuusaste vaikuttaa merkittävästi infektion kehittymiseen ja toipumisnopeuteen, joten laadullista arviointia pidetään yhtä tärkeänä kuin kvantitatiivisena. Hän on kaukana viimeisestä roolista lasten ja aikuisten hoidossa. Mutta miten käy ilmi, että IFA onnistuu tunnistamaan niin suuren määrän mikro-organismeja, jotka loistavat ihmisten ja eläinten kehossa, aiheuttavat haittaa ja heikentävät elämänlaatua?

Tutkimusmenetelmä perustuu useisiin vaihtoehtoihin (suora ja epäsuora - kilpailukykyinen ja ei-kilpailullinen) tehtävien suorittamiseksi, joista kukin on tarkoitettu tiettyihin tarkoituksiin. Tämä lähestymistapa mahdollistaa kohdennetun haun ja mahdollisimman lyhyessä ajassa tietyn patologian syyn tunnistamiseen. Eri luokkaryhmien Ig: n havaitsemiseksi käytetään 96-kaivoista levyä (polystyreenipaneeli), ja sorboidut rekombinanttiproteiinit sijaitsevat sen kaivoissa. Ne pelaavat antigeenejä ja ovat alkuvaiheessa kiinteässä vaiheessa.

Tultuaan reikään veriplasman kanssa, antigeenit tai vasta-aineet tunnistavat kohteen sen orientaation yhteydessä ja muodostavat kompleksin (AG - AT). Tämä muodostuminen on kiinnitetty entsymaattisella yhdisteellä (konjugaatti), joka myöhemmin ilmenee reiän muuttuneena värjäyksenä. ELISA suoritetaan erityisillä koejärjestelmillä, jotka on valmistettu erikoistuneissa laboratorioissa ja varustettu täydellä reagenssivalikoimalla.

Tämä analyysi voidaan suorittaa teloilla - aluslevyillä ja lukemisspektrometreillä, mutta ne vaativat käsityötä. Tietysti laboratorioassistentti on useita kertoja helpompaa ja nopeampaa suorittaa kaikki manipulaatiot täysin automatisoiduissa laitteissa. Niitä käytettäessä laboratorion henkilökunta vapautetaan suuresta määrästä yksitoikkoista toimintaa - pesua, hautaamista ja muuta rutiinia, mutta kaikilla lääketieteellisillä laitoksilla ei ole varaa tällaisiin kalliisiin laitteisiin.

Tutkimusmateriaalien tulkinta on yksinomaan laboratoriodiagnostiikan asiantuntijan toimivaltaa - vain hänelle voidaan kertoa tulokset sairauden etenemisen yksityiskohdista ja hienouksista. Tässä tapauksessa lääkärin on välttämättä harkittava mahdollisuutta saada väärät kielteiset tai väärät positiiviset vastaukset.

Materiaalin purku

Laadullisen entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen tuloksen tulisi olla yksiselitteinen johtopäätös - haluttu mikro-organismi löydettiin tässä verinäytteessä tai ei. Kvantitatiivinen analyysi osoittaa pitoisuuden tason, ja se voidaan ilmaista kahdella tavalla - arvo numeroina tai ”+” -merkkien lukumäärä.

Analysoidut indikaattorit

Tutkimusprosessissa perusteellinen tutkimus tärkeimmistä immuunivasteista, jotka osallistuvat immuunivasteeseen, kuten:

  • IgM - tämän luokan havaitseminen tarkoittaa tarttuvan taudin akuutin muodon kehittymistä. Negatiivinen IgM-hakutulos voi olla sekä todiste halutun patogeenin puuttumisesta että taudin siirtymisestä krooniseen kulkuun.
  • IgA - tämän luokan määritelmä ilman IgM: ää useimmissa tapauksissa, merkki tarttuvan taudin kroonisen tai piilevän muodon kehittymisestä.
  • IgM ja IgA (samanaikainen läsnäolo) - molempien lajien positiiviset tulokset osoittavat patologian akuutin muodon huipun.
  • IgG - sen läsnäolo osoittaa taudin muuttumisen krooniseksi muotoksi tai toipumiseksi ja immuniteetin muodostumiseksi määriteltävälle aineelle.

Tietyn luokan IG: n syntyminen ja kertyminen tapahtuu eri ajanjaksoina. Joten esimerkiksi IgM ilmestyy ensin, noin viiden päivän kuluttua patogeenin saapumisesta. IG: t ovat veressä noin 5-6 viikkoa, ja sitten häviävät vähitellen. Tällä hetkellä ne ovat käytettävissä määritykseen ELISA: lla. Noin 3-4 viikkoa sairauden alkamisen jälkeen ilmaantuu IgG, joka myöhemmin voi pysyä useita kuukausia. Mutta analyysissä he eivät aina pysty tunnistamaan.

IgA: ta muodostuu veressä 2–4 viikon ajan, kun taas 20% heistä sisältyy seerumiin ja 80% - limakalvojen salaisuuteen. Nämä immunoglobuliinit häviävät yleensä 2–9 viikon sisällä, mikä osoittaa taudinaiheuttajan tuhoutumisen ja potilaan toipumisen. Jos ELISA osoittaa edelleen IgA: n läsnäoloa, niin se merkitsee prosessin siirtymistä krooniseen muotoon.

Analyysitulosten asetukset

Saaduista tiedoista riippuen ELISA-vastaukset voidaan antaa taulukon muodossa, jossa on täydellinen luettelo kaikista vasta-aineista ja verenpaineesta ja merkintä positiivisesta tai negatiivisesta reaktiosta. Tietyissä tilanteissa näytetään kvantitatiivinen arvo - terävästi positiivinen, positiivinen, heikosti positiivinen tai negatiivinen tulos. Toinen vaihtoehto osoittaa vasta-aineiden määrän tutkitussa verinäytteessä..

Edellä mainittujen arvojen lisäksi ELISA-prosessissa tutkitaan toista kvantitatiivista parametria - AT: n aviditeetti-indeksiä, laskettuna prosentteina. Se osoittaa kuinka kauan tauti kestää - ts. Mitä korkeampi indikaattori, sitä enemmän aikaa patologia kehittyy..

Vaihtoehtoinen ELISA-menetelmä

Entsyymi-immunomääritys on melko tunnettu ja yleinen diagnoosi. Ehkä jotkut eivät ole koskaan kuulleet hänestä, mutta on yksi muunnelma tästä tutkimuksesta, joka tunnetaan vielä vähemmän laajalle ihmisryhmälle ja jossa otetaan ei-verinäyte. Tätä tekniikkaa kutsutaan okkultisen veren ulosteanalyysiin, ja monissa tapauksissa sillä vältetään ylimääräiset heikentävät toimenpiteet, joihin liittyy myös epämiellyttäviä tuntemuksia..

Piilevän veren (hemoglobiinimolekyylien) ELISA-testi mahdollistaa jopa pienen ruuansulatuskanavan verenvuodon havaitsemisen, jonka merkkejä ei löydy potilaan ulosteesta paljain silmin. Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys okkulttisesta verestä ihmisen ulosteessa lyhyessä ajassa voi osoittaa mahahaavan, polypoosin, divertikuloosin, kasvaimet, joihin varhaisissa vaiheissa ei liity tiettyjä oireita.

Tähän päivään mennessä on luotu tuhansia erilaisia ​​entsyymimmuunimääritysjärjestelmiä, jotka tarjoavat kyvyn löytää vasta-aineita ja verenpainetautiota valtavasta luettelosta patologioita. Siksi tätä analyysiä käytetään melkein kaikissa lääketieteen aloissa, kaikissa ikäryhmissä. Ja ehdoton vaarattomuus antaa sinun turvautua siihen raskauden aikana ja heikentyneiden potilaiden diagnosointiin.

ELISA syfilisestä

Mikä on ELISA syfilisestä?

ELISA syfiliselle - edullinen ja erittäin informatiivinen testi

ELISA on entsyymisidottu immunosorboiva määritys, jota käytetään erittäin herkkänä testinä erilaisten patologioiden, mukaan lukien syfilis, diagnoosissa. Voit tunnistaa taudin ja määrittää sen vaiheen mahdollisimman tarkasti.

Syfilis syntyy, kun bakteerit Treponema pallidum (Treponema pallidum) tunkeutuvat kehoon. 2 - 4 viikon kuluttua ihoon muodostuu kiinteä harsko lokalisoinnissa, jossa tuonti tapahtui, useimmiten syfiliselle ominainen papule muodostuu sukuelimille, mikä tarkoittaa primaarisen kuivan alkuvaihetta. Taudin kehittyessä papuleet muuttuvat haavaumiksi ja katoavat sitten useimmissa tapauksissa, mikä antaa potilaalle väärän toivon itsensä paranemisesta. Piilevä aika kuluu kuitenkin sekundaarisen kuivan vaiheeseen, kun taas treponemas leviävät jo koko kehoon ja tunkeutuvat kudoksiin ja elimiin. Ihoon ja limakalvoihin muodostuu useita ihottumia. Jos sitä ei hoideta, seuraava vaihe alkaa - tertiäärinen syfilis, jossa muodostuu ikenet ja vaurioittaa keskushermostoa, sydäntä, luukudosta, maha-suolikanavaa, suuonteloa ja muita elimiä.

Vasta-aineiden havaitseminen vahvistaa infektion

ELISA määrittelee primaarisen, toissijaisen, kolmannen (useimmiten vain alkuvaiheessa), synnynnäisen, toistuvan ja piilevän kuivan. Menetelmän ydin on havaita vasta-aineita, joita elin tuottaa vasteena treponemanan käyttöönotolle. Taudin alkuvaiheessa muodostuu luokan M vasta-aineita, muutaman viikon kuluttua niihin kiinnittyvät luokan G. immunoglobuliinit.Tietyt vasta-aineet konsentraatio vaihtelee syfilisen kehitysasteen mukaan, mikä antaa sinun määrittää taudin vaiheen. ELISAa suoritettaessa todellinen treponema on vaaleaa tai sen antigeenejä, joten testi liittyy treponemallyanalyyseihin.

Menetelmän edut ja haitat

Mikään tutkimusmenetelmä ei ole ilman puutteita.

Aikaisemmin syfilis-diagnoosissa käytettiin erilaisia ​​menetelmiä, kuten: RPHA (passiivinen hemagglutinaatioreaktio), RW (Wassermanin reaktio), MR (saostumisen mikroreaktio), RSK (komplementin sitomisreaktio) ja muut testit. Erilaiset analyysit seulontatesteinä ja yhtenäisen järjestelmän puute aiheuttivat usein sekaannusta ja seurauksena negatiivisiksi seurauksiksi, esimerkiksi kun väärän negatiivisen tuloksen luovuttajasta tuli välittäjä vastaanottajien tartunnassa. Vuodesta 2006 lähtien testauksesta on tullut standardisoidumpaa. ELISA tunnustettiin yhdeksi tehokkaimmista diagnoosimenetelmistä, ja sitä käytetään nykyään varmennustestausnäyttönä, kun havaitaan positiivinen tulos muusta kuin treponemallista..

Nontreponemal-testit ovat seulontatestejä.

Nyt ei-treponemal-analyysejä käytetään tunnistamaan mahdollinen syfilis-infektio kaikissa väestöryhmissä, ts. Ne ovat seulontatestejä. Epävarmoilla tai positiivisilla tuloksilla määrätään IFA- tai muu treponemalianalyysi. ELISAsta on tullut yksi johtavista syfilistesteistä etujensa vuoksi:

  • korkea herkkyys treponemivasta-aineiden havaitsemiseksi erittäin alhaisella pitoisuudella;
  • korkea spesifisyys saavutetaan käyttämällä vaaleita treponemaantigeenejä;
  • tulosten objektiivisuus automaattisesta kirjanpidosta johtuen;
  • helppo reaktion asettaminen suoritetaan täydellisen diagnoosisarjan ansiosta;
  • testin yleispätevyys: voidaan käyttää populaation ennaltaehkäisevään tutkimukseen, taudin kaikkien vaiheiden diagnosointiin ja epäilyttävien tulosten todentamiseen.

Treponema pallidumin vasta-aineet ovat samanlaisia ​​kuin tietyn tyyppiset immunoglobuliinit, joita muodostuu muun tyyppisten infektioiden aikana, siksi ELISA-spesifisyydestä huolimatta vääriä positiivisia tuloksia voidaan havaita pieninä määrinä. Toinen ELISA-haitta on, että sairauden edetessä vasta-aineiden määrä vähenee, mikä voi johtaa väärään negatiiviseen tulokseen..

Indikaatiot tutkimukselle.

Raskausjakso - käyttöaihe analyysiä varten

ELISA suoritetaan varmistuskokeena ei -ponponemisen analyysin jälkeen, mutta se voi toimia myös seulonta-analyysinä. Nimitetään seuraavissa tapauksissa:

  • aikataulun mukainen testaus haettaessa tietyntyyppisiä töitä;
  • rutiininomainen infektioriskin tunnistaminen;
  • sairaalahoito, ennen leikkausta
  • luovutukselle;
  • raskaus;
  • syfilis-oireiden seulonta.

Syfilis voi epäillä erityisellä merkillä - kovan kyynelmuodoksen muodostumisesta sekä nivel- ja luukipuista, sukupuolielinten turvotuksesta, kehon lämpötilan noususta 38 ° C: seen, imusolmukkeiden kasvusta. Ennaltaehkäisynä suositellaan säännöllistä tutkimusta aktiivisesta seksielämästä vaihtamalla kumppaneita.

Opintojen valmistelu

Kuumeisen ajanjakson aikana sinun tulisi pidättäytyä testistä.

Väärin tuloksen saamisen riskin minimoimiseksi sinun tulee noudattaa sääntöjä.

  1. Verinäyte annetaan tyhjään mahaan laboratoriosta riippuen, nälkäajan tulisi olla 4-12 tuntia.
  2. Edelliseen päivään ei sisälly alkoholia ja rasvaisia ​​ruokia, tupakointi on rajoitettu vähintään tuntia ennen tutkimusta.
  3. Analyysin aattona voit juoda vain puhdasta vettä, ei ole sallittua käyttää mehuja, kahvia, huumeita.
  4. Kaikki muut tutkimukset ja lääketieteelliset toimenpiteet suoritetaan testin läpäisemisen jälkeen..
  5. Sinua ei pidä testata, jos edellisinä päivinä on ollut kuume tai rokotus on annettu..
  6. Naisia ​​ei suositella ottamaan testiä kuukautisten aikana..

Tulosten salaaminen

Positiivinen tulos osoittaa viruksen esiintymisen

  • läsnäolo treponema kalpea infektio;
  • väärät positiiviset tulokset muiden tekijöiden ollessa läsnä;
  • aikaisemmin hoidetun kuivan vaikutukset.
  • infektion puute;
  • kupan inkubaatio (varhainen primaari);
  • myöhäinen jakso, mukaan lukien tertiäärisen syfilisen myöhäiset kehitysvaiheet.

Väärä positiivinen tulos ja sen syyt

Väärä positiivinen testi voi olla diabetes

Treponema pallidum on spirokeatti, joka sisältää 42 geeniperhettä, joista 17% on samanlaisia ​​kuin muun tyyppisten bakteerien proteiinit, mikä provosoi muutamissa tapauksissa positiivisen tuloksen muiden mikro-organismien aiheuttaman tartunnan läsnäollessa. Esimerkiksi useilla autoimmuunisairauksilla havaitaan anti-fosfolipidivasta-aineita, jotka ovat samanlaisia ​​kuin syfilisessä. 2000-luvun vaihteessa havaittiin, että tässä tapauksessa ero vasta-aineiden välillä on riippuvuuskerroin, autoimmuunisairauksissa vasta-aineet ovat riippuvaisia ​​p2-glykoproteiini-1: stä ja syfilisessä ne eivät ole riippuvaisia. Mutta toistaiseksi kysymys väärien positiivisten reaktioiden esiintymisestä on edelleen avoin, koska syy tällaisiin tuloksiin ei aina ole selvä.

Tilastojen mukaan useimmiten väärät positiiviset tulokset ilmenevät seuraavista tapauksista:

  • hepatiitti;
  • lepra;
  • sydäninfarkti;
  • päihtymys;
  • sidekudossairaudet;
  • autoimmuunisairaudet;
  • diabetes;
  • raskaus;
  • kuukautiset;
  • rokotuksen jälkeinen aika.

Treponemalla on samankaltaisuuksia muiden patogeenien kanssa

Treponema pallidum ei ole ainoa trepanilaji, muut spiroskeetit kuuluvat patogeenisiin patogeeneihin: Treponema pertenue (javan aiheuttaja), Treponema bejel (beelon aiheuttaja), Treponema carateum (pintin aiheuttaja) ja monet muut. Mikroskooppitutkimuksessa ne eroavat vain vähän vaaleasta treponemasta, ja niitä vastaan ​​suunnatut vasta-aineet ovat samanlaisia ​​kuin syfilisessä olevat immunoglobuliinit..

Positiivinen tulos voi heijastaa taudin esiintymistä aiemmin, koska luokan G immunoglobuliinit voivat pysyä verenkierrossa vuosien ajan.

Väärä negatiivinen tulos ja sen syyt.

Inkubointijaksolla tulos voi olla negatiivinen

Sairauden alkuvaiheessa ELISA osoittaa negatiivisen tuloksen, tämä ajanjakso on inkubaatio, kun primaarista syfilistä ei ole vielä tapahtunut, eikä taudille ole ominaisia ​​merkkejä. Inkubointiaika verrattuna syfilis-infektion tietoihin 1900-luvun puolivälissä kasvoi 7-10 päivällä, tällä hetkellä se on noin 3 viikkoa. Tämä tarkoittaa, että treponeman tunkeutumisen jälkeen kehoon havaitaan väärin negatiivinen tulos 3 ja joskus useamman viikon ajan.

Terapian puuttuessa kolmannesta syfilisestä kehittyy yleensä 3–5 vuoden kuluttua tartunnan hetkestä. Joissain tapauksissa tauti voi ilmetä 10–15 vuoden kuluttua oireettoman vaiheen ja kupan muutoksen välillä vaiheesta toiseen. Tähän mennessä vasta-aineiden määrä on vähentynyt merkittävästi tai niitä ei ole kokonaan, mikä johtaa väärään negatiiviseen tulokseen. Joidenkin raporttien mukaan erilaiset tartuntataudit, diabetes mellitus ja tiettyjen antibioottien käyttö voivat vaikuttaa väärään väärään tulokseen..

ELISA-verikoe

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys (ELISA) suoritetaan kehon suojatoimintojen kattavalle arvioinnille. Tutkimuksen aikana määritetään immuunisolujen lukumäärä ja ominaisuudet, tarvittavien vasta-aineiden läsnäolo. ELISA-verikoe suoritetaan tarttuvien, hematologisten, autoimmuunisairauksien, primaaristen ja sekundaaristen immuunipuutosten diagnosoimiseksi. Mieti, mikä on verikoe ELISA: lla ja mitkä indikaatiot ovat olemassa tässä tutkimuksessa.

Mikä se on

ELISA on laboratoriomenetelmä, jolla vasta-aineet tai antigeenit määritetään verinäytteessä. Tätä tutkimusta käytetään immunoglobuliinien, immunologisten kompleksien, hormonien määrän havaitsemiseen..

Indikaatiot analyysille

ELISA-verikokeen nimittämistä varten on olemassa seuraavat indikaatiot:

  • sukupuoliteitse tarttuvien infektioiden diagnoosi - ureaplasma, mycoplasma, klamydia, trichomonas, syfilis;
  • virustautien diagnoosi - sytomegalovirus, herpes, hepatiitti, Epstein-Barr-virus;
  • hormonitason määrittäminen;
  • syövän diagnoosi;
  • immuunikatoisuuden määrittäminen;
  • allergioiden diagnoosi;
  • preoperatiivinen kattava tutkimus ennen elinsiirtoa;
  • hoidon tehokkuuden arviointi.

Menetelmän periaate

Entsyymi-immunomääritysmenetelmän periaate perustuu veressä olevien spesifisten vasta-aineproteiinien - immunoglobuliinien - määrittämiseen. Ihmisen immuunijärjestelmä tuottaa immunoglobuliineja, kun antigeenejä (vieraita mikro-organismeja) pääsee kehoon. Sellaiset immuunimolekyylit sitoutuvat moniin tarttuviin patogeeneihin kehossa ja neutraloivat niitä..

Immunoglobuliinilla on tärkeä ominaisuus - spesifisyys. Tämän vuoksi ne voivat sitoutua spesifiseen antigeeniin muodostaen antigeeni-vasta-ainekompleksin. Verikokeen ELISA: n aikana tämä kompleksi määritetään kvalitatiivisesti ja kvantitatiivisesti.

Immunoglobuliineja on viisi. Mutta yleensä määritetään kolme luokkaa - immunoglobuliinit A, M, G. Nämä vasta-aineet kerääntyvät kehoon eri aikoina tartunnan hetkestä..

  • Luokan M immunoglobuliinit (IgM) ilmenevät veressä aivan ensimmäisenä viidentenä päivänä infektiosta. Ne ovat kehossa 5-6 viikkoa, sitten katoavat verenkiertoon. IgM-vasta-aineet osoittavat sairauden akuutin ajanjakson tai taudin pahenemisen kroonisella kulullaan.
  • Noin 3-4 viikkoa tartunnan jälkeen luokan G immunoglobuliinit (IgG) ilmaantuvat veressä. Ne voivat esiintyä ihmisen veressä useita kuukausia tai jopa vuosia. Verikokeen ELISA-tulkinnan mukaan jos kahdessa peräkkäin kahden viikon jälkeen otetussa verinäytteessä on lisääntynyt IgG-immunoglobuliinien lukumäärä, he puhuvat nykyisestä tartunnasta tai uudelleen infektiosta - uudelleeninfektiosta samalla infektiolla.
  • Luokan A immunoglobuliinit (IgA) voidaan havaita tällä testimenetelmällä 2–4 viikkoa tartunnan tai tartuntataudin pahenemisen jälkeen. Näistä vain 20% kiertää veressä, loput ovat limakalvojen salaisuudessa. IgA-vasta-aineet katoavat verenkierrosta 2–8 viikkoa tartunta-aineiden tuhoamisen jälkeen. Näiden immunoglobuliinien katoaminen tarkoittaa parannusta infektioon. Jos veressä määritetään IgA-vasta-aineiden esiintyminen sairauden päättymisen jälkeen, niin tauti on siirtynyt krooniseen vaiheeseen.

Analyysin valmistelu

Veren analysoimiseksi ELISA-menetelmällä käytetään useimmiten ihmisen verta. Mutta voit myös tutkia lasimaisen, aivo-selkäydinnesteen, amnioottisen nesteen sisältöä.

Verinäyte tutkimusta varten otetaan potilaalta nielun suonesta. On suositeltavaa luovuttaa verta tyhjään vatsaan (vähintään 12 tunnin on kuluttava viimeisen aterian alkamishetkestä). On tarpeen ilmoittaa lääkärille, jos potilas käyttää lääkkeitä, koska jotkut niistä voivat muuttaa analyysin tulosta. Alkoholin ja huumeiden käyttö vaikuttaa tutkimustulosten luotettavuuteen..

Salauksen purkaminen

Tämän analyysin tulosmuoto osoittaa positiivisen (+) tai negatiivisen (-) tuloksen kunkin immunoglobuliiniluokan määrityksestä.

Harkitse ELISA-verikokeen mahdollisen dekoodauksen tulkintaa.

  • IgM: n, IgG: n, IgA: n negatiivinen tulos - immuniteetin puute infektioille.
  • Negatiiviset IgM-, IgA- ja IgG-positiiviset - tartunnan jälkeinen tai rokotuksen jälkeinen immuniteetti.
  • Negatiiviset tai positiiviset IgG-, IgA- ja IgM-positiiviset - akuutti infektio.
  • IgM: n, IgG: n, IgA: n positiivinen tulos - kroonisen tartuntataudin paheneminen.
  • Negatiiviset IgM-tulokset ja negatiiviset tai positiiviset IgG-tulokset, IgA-tulokset - krooninen infektio.
  • Negatiivinen IgM-tulos ja määrittelemätön IgG, IgA - toipuminen.

Menetelmän edut

ELISA-verikokeella on monia etuja. Tärkeimmät voidaan erottaa toisistaan:

  • suhteellisen korkea tarkkuus (herkkyys);
  • varhaisen diagnoosin mahdollisuus;
  • kyky seurata tarttuvan prosessin dynamiikkaa;
  • korkea yhdistymisaste, joka mahdollistaa massaseulonnan;
  • analyysituloksen saamiseksi vaaditaan lyhyt aika;
  • mukavuus työssä;
  • analyysin kaikkien vaiheiden automatisointi;
  • suhteellisen alhaiset kustannukset.

haitat

ELISA-menetelmän haittana on, että joskus se antaa vääriä negatiivisia tai vääriä positiivisia tuloksia. Tutkimuksessa tehtyjen teknisten virheiden lisäksi väärien tulosten syy voi olla potilaan nivelreuma, kroonisten sairauksien esiintyminen (joissa tuotetaan vasta-aineita), aineenvaihduntahäiriöt ja tiettyjen lääkkeiden käyttö.

ELISA-verikoe loisille

Tätä menetelmää käyttämällä verikokeet selvittävät seuraavien parasiittisten prosessien esiintymisen kehossa:

  • ascariasis;
  • trikinosinoosi - analyysi suoritetaan useita kertoja, vasta-aineiden enimmäistaso määritetään 4-12 viikon kuluttua tartunnasta;
  • kystikerkoosin;
  • teniosis;
  • fascioliasis - vasta-aineet määritetään sairauden akuutissa vaiheessa;
  • opisthorchiasis - suorittaa erotusdiagnoosi taudin kroonisen ja akuutin muodon välillä;
  • Giardiaasi;
  • sisäelinten ja ihon leishmaniasis;
  • ameebatauti;
  • toksoplasmoosi.

ELISA-verikoetta loisille käytetään antigeenien (loisten ja niiden aineenvaihduntatuotteiden) ja vasta-aineiden (immunoglobuliinien) havaitsemiseksi. Immunoglobuliinit tuotetaan kehossa antigeenien vasta-aineina. Tämän menetelmän spesifisyys loisten määrittämisessä on 90%. Tämän analyysin avulla voit määrittää loisten tyyppi, niiden lukumäärä ja vasta-aineiden määrän vuoksi prosessien dynamiikan jäljittämiseksi.

STD-diagnoosin kuvaus: entsyymi-immunomääritys (ELISA)

Viime vuosikymmenien käytettävissä olevien diagnostiikkatekniikoiden luettelo laajenee nopeasti, diagnoosit yrittävät uusia menetelmiä yhdistää kaikkien aikaisempien testien edut ja päästä eroon kaikista aiemmista puutteistaan.

Viime aikoina diagnostiikkamenetelmien luettelossa esiintyy useammin entsyymeihin sidottua immunosorbenttimääritystä - moderni ja melko uusi testi, joka on vähän tiedossa tavalliselle henkilölle, joka ei ole yhteydessä lääketieteeseen. Siitä huolimatta tämä tekniikka laajentaa nopeasti seuraajiensa joukkoa pätevän lääkintähenkilökunnan keskuudessa. Mikä se on ja missä tapauksissa sitä tulisi käyttää, voit yrittää selvittää sen tarkastelemalla sen ominaisuuksia ja pääominaisuuksia.

Menetelmän ydin

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys on instrumentti-laboratoriotekniikka, joka perustuu molekyylin antigeeni-vasta-ainereaktioon, joka mahdollistaa spesifisten proteiinien havaitsemisen biologisissa materiaaleissa (näytteet tutkimusta varten). Sellaiset proteiinit voivat olla entsyymejä, erilaisia ​​mikro-organismeja (viruksia, bakteereja, sieniä), alkueläimiä jne..

Menetelmän löytämisen jälkeen hänelle annettiin nimi ELISA-testi, joka ei liity löytöiden nimiin, mutta joka on lyhenne englanninkielisessä versiossa olevasta täydellisestä nimestä - entsyymisidottu immunosorbenttimääritys. Lääkärit ympäri maailmaa käyttävät tätä nimeä, jotkut venäjänkielisten maiden lääkärit kutsuvat myös tällaista tutkimusta.

Menetelmän perusperiaate on antigeeni-vasta-aineen molekyylireaktio.

Antigeeni on mikä tahansa vieras molekyyli, joka kulkee ihmiskehoon osana patogeenimikrobia. Antigeenit ovat yleensä proteiinimolekyylejä. Mikro-organismien lisäksi sellainen ”muukalainen” voi olla vieraan veren soluja, jotka eivät vastaa ryhmän tai Rh-tekijää.

Vastauksena tällaisen antigeenin nauttimiseen kehossa käynnistyy immuunireaktio, jonka tarkoituksena on suojata vieraita molekyylejä vastaan. Tämä tapahtuu immuunijärjestelmän erityisten aineiden - vasta-aineiden (immunoglobuliinien) synteesin vuoksi. Jokainen vasta-aine sopii vain spesifiselle antigeenille ja neutraloi patogeeninen "muukalainen" saattamalla se kosketukseen yhdeksi komplekseksi. Juuri tällaisen sitoutumisen prosessia kutsutaan antigeeni-vasta-ainereaktioksi.

Vasta-aineiden tyypit

Kaikki vasta-aineet (immunoglobuliinit) on jaettu viiteen tyyppiin sen mukaan, missä immuunivasteen vaiheessa ne ilmestyvät:

  • Luokka M (IgM). Tällaisten immunoglobuliinien nousu havaitaan muutaman päivän kuluessa infektion tai muun patogeenisen aineen kulkeutumisesta. Noin 6 viikon kuluttua ne alkavat liueta ja katoavat..
  • Luokka G (IgG). Syntetisoitiin toisessa vaiheessa sairauden voittamiseksi. Kun vieraat molekyylit on poistettu kokonaan, niitä on edelleen veressä pienessä määrin immuniteetin aikaansaamiseksi uudelleeninfektiotapauksissa.
  • Luokka A (IgA). Tällaiset immunoglobuliinit vastaavat kehon limakalvojen suojaavista toiminnoista, joiden läpi patogeeniset elementit tunkeutuvat helpoimmin, koska limakalvojen epiteeli on paljon ohuempi ja herkempi kuin tavalliset ihonominaisuudet..
  • Luokka E (IgE). Nämä spesifiset globuliinit ohjaavat vaikutustaan ​​ihmiskehoon vaikuttaviin loistartuntoihin. Ne ilmestyvät riippumatta siitä, mihin elinjärjestelmään loiset vaikuttavat..
  • Luokka D (IgD). Tämä luokka löytyy aina terveistäkin ihmisistä. Alle 10-vuotiailla lapsilla se kasvaa vähitellen, minkä jälkeen sen määrä absoluuttisen terveydentilan ollessa muuttumaton. Jos indikaattori nousee normaalin yläpuolelle, se voi viitata raskauteen, astmaan, immuunipuutteeseen jne..

ELISA-diagnostiikassa immunoglobuliinien IgG-, IgM- ja IgA-tasot ovat tärkeimmät. Opintosuoritusten perusteella voit selvittää, onko henkilöllä ollut sairaus aiemmin vai onko hänellä hiljattain tehty sopimuksia, onko hänellä kehittynyt immuniteetti vai onko hänen ruumiinsa puolustuskykyinen patologiaa vastaan.

Entsyymi-immunomäärityksen edut ja haitat

Tällä hetkellä ELISA on yksi tarkimmista ja herkeimmistä menetelmistä. Eri lääketieteen alojen asiantuntijat ovat ottaneet sen käyttöön ja laajentavat edelleen sen soveltamisalaa..

Menetelmän edut

  • Tietojen korkea tarkkuus.
  • Herkkyys (mahdollistaa tarvittavan aineen havaitsemisen, vaikka patogeeni olisi minimaalisesti näytteessä).
  • Mahdollisuus diagnoosiin taudin varhaisina päivinä tai inkubaatiokaudella.
  • Tiedonkeruun nopeus verrattuna muihin samankaltaisten menetelmien menetelmiin.
  • Prosessin korkea automatisointi ja minimaalinen ihmisen osallistuminen, mikä vähentää suorittajan tarkkuutta.
  • Tietojen hankkiminen patologisen prosessin vaiheesta ja valitun hoidon tehokkuudesta.
  • Kivuton ja heikko invasiivisuus materiaalia valittaessa.

Menetelmän haitat

  • Useimmissa tapauksissa se antaa sinun määrittää kehon reaktion patogeeniseen aineeseen, eikä itse patogeeniin.
  • Ennen tutkimusta väitetyn sairauden on oltava tarkkaan tiedossa, koska testi on erittäin spesifinen..
  • Teknisten kysymysten, lääkkeiden käytön, useiden kroonisten sairauksien tai aineenvaihduntahäiriöiden samanaikainen esiintyminen potilaan kehossa aiheuttamien väärien indikaattorien todennäköisyyttä.
  • Tulosten tulkintaa saa suorittaa vain erittäin pätevä asiantuntija, koska saatujen tietojen tulkitseminen edellyttää erityiskoulutusta ja laajaa lääketieteellistä tietämystä tietyllä alueella.
  • ELISA on melko harvinainen analyysi, joten sitä ei suoriteta kaikissa diagnostisissa laboratorioissa.
  • Menetelmä on melko kallis, koska reagenssien lisäksi laboratoriossa on oltava kalliita lukuisia laitteita ja näytteitä antigeeneistä, jotka on tuotettu erityisissä laitoksissa.

Missä tapauksissa käytetään entsyymi-immunomääritystä

Täydellinen luettelo entsyymi-immunomäärityksen nimittämisestä on erittäin laaja, se sisältää melkein kaikki lääketieteen haarat.

IFA: ta käytetään useimmiten sellaisiin tarkoituksiin:

  • tartuntatautien havaitseminen;
  • sukupuolitautien diagnosointi;
  • immuunitilan tai yksittäisten autoimmuunisairauksien määrittäminen;
  • kasvainmarkkereiden tunnistaminen;
  • hormonin määritys.

Tartunta- ja virustautien tapauksessa tekniikka mahdollistaa seuraavien patologioiden tunnistamisen:

  • kaikenlaiset virushepatiitit;
  • Epstein-Barr-virus;
  • kaikki TORCH-tartunnat;
  • kaikenlaiset suolen tulehdukset;
  • HIV
  • kuppa;
  • useimmat loistaudit;
  • Helicobacteriosis jne..

Lisäksi ELISA antaa sinun nopeasti ja tehokkaasti määrittää sydänkohtauksen, arvioida kehon lisääntymismahdollisuuksia, tunnistaa allergiat, lähteet jne..

Entsyymisidottua immunosorbenttimääritystä käytetään kliinisten tutkimusten suorittamiseen uusien lääkkeiden kehittämisen aikana ja arvioitaessa niiden vaikutusta ihmiskehoon..

Näytetyypit ja menetelmät niiden valintaa varten tutkimusta varten

Entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen tutkittu materiaali on useimmiten verta, joka otetaan potilaan ulnar-laskimosta. Näytteet otetaan tyhjään mahaan, pääasiassa aamulla. Verestä valinnan jälkeen ne muotoillut solut, jotka häiritsevät tutkimusta, erotetaan ja poistetaan, jättäen vain seerumin.

Sukupuolielinten infektioiden diagnosoinnissa materiaaliksi tulee usein rasvakeinoja sukupuolielinten limakudoksista, virtsaputken tai kohdunkaulan limasta, peräsuolen näytteistä, eroosion tai haavaumien aiheuttamista nivusiin ja muihin kehon osiin. Sienet voidaan ottaa suuontelosta sekä nenänielusta.

Joskus synnytys- ja gynekologisessa käytännössä käytetään entsyymi-immunomääritystä raskauden aikana amnioottisen nesteen tilan määrittämiseksi. Tässä tapauksessa amnionivedestä tulee näyte. Tätä varten otetaan pieni määrä nestettä, lävistäen sikiön rakon pitkällä neulalla. Kaikki manipulaatiot suoritetaan steriilillä instrumentilla mahdollisten riskien minimoimiseksi..

Materiaalista tulee usein aivo-selkäydinnestettä tai seroosinestettä. Tämä tapahtuu paikallispuudutuksessa, joka injektoidaan..

Selvitä, minkä tyyppiset materiaalit ovat välttämättömiä entsyymisidonnaiselle immunosorbenttimääritykselle, jos tutkimusta ohjaava asiantuntija. Usein otetaan monen tyyppisiä näytteitä kerralla tai eri paikoista. Lääkärin, joka antaa lähetyksen tämän tyyppiseen tutkimukseen, tulisi myös kertoa potilaalle valmistautumisesta biomateriaalin luovuttamiseen.

Valmistelu entsyymimmuunimääritystä varten

Entsyymi-immunomäärityksen jälkeen saatujen tietojen tarkkuuden lisäämiseksi valmistelu materiaalin valitsemiseksi on seuraava:

  • Suljetaan pois antibiootit, viruslääkkeet ja antimykoottiset lääkkeet 10 päivää ennen tutkimusta;
  • päivässä on tarpeen sulkea pois alkoholi, tupakointi ja huumausaineiden käyttö;
  • saman ajanjakson aikana on vältettävä fyysistä ylikuormitusta;
  • varoittaa määräävää asiantuntijaa kaikista potilaan käyttämistä lääkkeistä;
  • ilmoita lääkärille raskaudesta tai epäilystä raskaudesta.

Parasta, jos testausmateriaalit valitaan tyhjään mahaan aamulla..

Jos diagnoosin tarkoituksena on selvittää hormonaalisen taustan tila, on tärkeää varmistaa rauhallinen tila aattona ja välttää hermostunut jännitys. Naisilla hormonien verenluovutus määräytyy selvästi kuukausijakson ajalta, kuten lääkäri toteaa ajankohtana.

2-3 päivää ennen materiaalin valintaa on välttämätöntä jättää paistetut ja rasvaiset valikosta, ja älä syö ennen hepatiitti-analyysiä sitrushedelmiä ja muita hedelmiä ja vihanneksia oranssina ja keltaisena.

Entsyymi-immunomäärityksen tulosten dekoodaus

Laadullisen tutkimuksen tulos osoitetaan yleensä merkkeillä “+” (löydetty) tai “-” (ei löydy).

Tiettyjen ryhmien immunoglobuliinien esiintyminen tai puuttuminen voi tehdä seuraavat johtopäätökset:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) - taudin immuunijärjestelmä puuttuu kokonaan (keho ei ole aiemmin tavannut tämän tyyppistä antigeeniä);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) - aiemmin oli törmäys tämän antigeenin tai rokotteen kanssa;
  • JgM (+), JgG (- / +), JgA (- / +) - akuutti patologinen prosessi (todennäköisimmin primaarinen);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - kroonisen kulun prosessi;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) - relapsi;
  • JgM (-) - toipumisen vaihe.

Kvantitatiivisilla arvoilla on suuri tietokuorma, mutta vain hoitava lääkäri voi tulkita niitä aikaisempien indikaatioiden, potilaan iän ja kunkin sairauden normien perusteella. Tästä syystä et voi arvioida tuloksia itse..

Kuinka kauan odottaa tuloksia

Tällä tekniikalla on monia variaatioita riippuen siitä, mikä ajanjakso käsillä olevien tietojen vastaanottamiselle määritetään. ELISA-diagnoosin kesto on keskimäärin 4-6 tuntia, mikä antaa sinulle tulokset seuraavana päivänä.

Pisin menetelmä vie jopa 10 päivää, esimerkiksi HIV-tartunnan sattuessa.

Kiireellisessä tapauksessa on mahdollista käyttää pikamenetelmiä, joissa vastaus saadaan 1-2 tunnin kuluttua.

Mistä saan IFA-testin?

Koska tämän tyyppisen diagnoosin suorittamiseen käytettävät laitteet ovat melko kalliita, kaikki laboratoriot eivät voi ostaa niitä. Lisäksi spesifisiä antigeenejä sisältävillä testeillä on rajoitettu säilyvyys (yleensä noin vuosi), joten ne tarvitsevat jatkuvaa päivitystä..

Näistä syistä IFA-laboratorioita ei ole kaukana kaikista valtion lääketieteellisissä laitoksissa. Useimmiten sinun on otettava yhteyttä suuriin yksityisiin lääketieteellisiin tai suuriin diagnoosikeskuksiin.

IFA-tutkimuksen suorittamiseksi laboratoriolla on oltava erityinen lupa, ja henkilöstön ja laboratorion avustajien on suoritettava erityiskoulutus.

Useimmiten lääkäri suosittelee erityistä diagnostiikkakeskusta tai laboratoriota, joka suuntaa potilaan tutkimukseen.

Entsyymin immunomääritys

Tämän tutkimuksen hinta riippuu maan alueesta ja palvelua tarjoavan klinikan tasosta. Moskovassa yhden antigeenin määrittämisen vähimmäishinta alkaa 700 ruplasta. Jos on tarpeen tunnistaa useita immunoglobuliineja kerralla, hinta tehdään yhteenveto.

Kiireellisessä analyysissä kustannukset nousevat 150-200 ruplaa. jokaiselle antigeenille.

Huolimatta suhteellisen korkeista kustannuksista, entsyymisidottu immunosorboiva määritys antaa sinun tehdä potilaan tutkimuksesta mahdollisimman informatiivista ja nopeaa, mikä lyhentää hoitoa edeltävää aikaa ja antaa sinun vakauttaa henkilön tila nopeasti.

Tämä video esittelee elokuvan "Entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen perusteet".

Entsyymiin kytketty immunosorbenttimääritys (ELISA, ELISA). Tutkimuksen ydin, menetelmän periaate ja vaiheet. Analyysi vasta-aineille, vasta-aineluokat, immuunikompleksi.

Solutekniikan, molekyylibiologian, genetiikan, fysiikan, kemian ja useiden muiden huipputeknologian alojen kehittämisen yhteydessä päivittäisessä käytännössä otetaan käyttöön uusia korkean tarkkuuden ja huipputekniikan menetelmiä. Nämä poikkitieteelliset suuntaukset vaikuttavat sekä lääketieteellisen tiedon kenttään että siihen liittyviin biologisten, biokemiallisten ongelmien aloihin. Viimeisen kymmenen vuoden aikana kliinisen laboratoriodiagnostiikan menetelmä, nimeltään entsyymi-immunomääritys, on tullut laajalle levinneeksi ja otettu käyttöön massakäytännössä..

Yleensä immunologisten entsymaattisten ja radiologisten reaktioiden tekniikoita on käytetty laajasti solujen, soluviljelmien, erilaisten kudosten tyypittämisessä XX luvun 80-luvun alusta. Nämä menetelmät olivat kuitenkin erittäin aikaa vieviä, eivät yhtenäisiä, standardoimattomia, mikä sulki pois niiden käytön terapeuttisissa ja diagnostisissa tarkoituksissa drovesissa. Vain kapeat, korkean teknologian ja erittäin erikoistuneet laboratoriot käyttivät näitä menetelmiä..

Teknologian, mikroteknologian ja erilaisten biopolymeerimateriaalien tuotannon myötä on kuitenkin mahdollista tuottaa valmiita entsyymimmuunimääritysdiagnostiikkasarjoja, joita voidaan käyttää laajaprofiilisten lääketieteellisten laitosten laboratorioissa. ELISA: ta käytetään laajalti kaikenlaisten infektioiden (klamydia, syfilis, sytomegalovirus, toksoplasmoosi, herpes jne.), Sekä akuutin että kroonisen, sekä latenttien muotojen, jotka esiintyvät ilman kliinisiä oireita, diagnosoinnissa. Tätä menetelmää käytetään myös kroonisten kroonisten infektioiden hallintaan. sairauksiin. Yritetään selvittää, mikä tämä menetelmä on ja mitkä periaatteet ovat sen taustalla.?

Entsyymiin sidotut immunosorbenttimäärityskomponentit - immuunivaste ja entsymaattinen reaktio

Mikä on immuunivaste? Mikä on vasta-aine, antigeeni?

Mikä on immuunivaste? Mikä on antigeeni??
Ensinnäkin analysoimme mitä immuunireaktiot ovat. Immuunireaktiot ovat spesifisiä reaktioita antigeenin sitoutumisesta vasta-aineeseen immuunikompleksin muodostamiseksi. Mitä se tarkoittaa? Minkä tahansa organismin kunkin solun pinnalla on erityisiä rakenteita, joita kutsutaan antigeeneiksi. Antigeenit ovat yleensä molekyylejä, jotka kuljettavat tietoa solusta (samanlainen kuin tiedot henkilön tunnuksesta, joka ilmaisee kyseisen henkilön perustiedot).

Yksilö- ja lajiantigeenit - mikä se on? Miksi näitä antigeenejä tarvitaan??

On olemassa yksittäisiä antigeenejä, se on, luontainen vain tälle erityiselle organismille. Nämä yksittäiset antigeenit ovat erilaisia ​​kaikille ihmisille, ne ovat samanlaisia ​​toisiinsa, mutta silti erilaisia. Kahta identtistä kopiota yksittäisistä antigeeneistä ei ole luonnossa!

Toinen päätyyppi antigeenejä on lajiantigeenit, ts. Tietyntyyppiselle elävälle olennolle ominainen. Esimerkiksi henkilöllä on oma kaikille ihmisille yhteinen lajiantigeeni, hiirillä on oma hiiren lajiantigeeni jne. Kunkin solun pinnalla on välttämättä läsnä spesifinen ja yksilöllinen antigeeni.

Immuunijärjestelmän solut käyttävät lajiantigeeniä "ystävän tai vihollisen" tunnistamiseen.

Kuinka antigeenitunnistus tapahtuu?

Immuunisolu sitoutuu epäilyttävään soluun ja tunnistaa yksittäisen antigeenin. Immuunisolun muistiin "kirjataan" kuten "antigeeni" näyttää. Siten, jos epäilyttävän solun antigeeni on sama kuin sen antigeenin kuvaus, silloin oman organismin tämä solu ei ole vaara. Sitten immuunisolu "yhdistyy" ja lähtee. Ja jos antigeeni ei vastaa "meidän" kuvausta, niin immuunisolu tunnistaa tämän solun "vieraana", mikä tarkoittaa, että se on potentiaalisesti vaarallinen koko organismille. Tässä tapauksessa immuunisolu ei "irrota", vaan alkaa tuhota vaarallinen esine. Tällaisen immunologisen tunnistuksen tarkkuus on hämmästyttävä - 99,97%. Virheitä ei käytännössä ole!

Mikä on vasta-aine, immuunikompleksi?
Ja mikä on vasta-aine?

Vasta-aine on erityinen molekyyli, joka sijaitsee immuunisolun pinnalla. Se on vasta-aine, joka sitoutuu epäilyttävän solun antigeeneihin. Lisäksi vasta-aine lähettää informaation soluun, jossa tunnistus tapahtuu, ja vastaanottaa paluusignaalin kahdesta "omasta" tai "muukalaisesta". Kun signaali "oma" vasta-aine tuhoaa yhteyden antigeeniin ja vapauttaa solun.

Mikä on immuunikompleksi??
Kun signaali on “vieras”, tilanne kehittyy eri tavalla. Vasta-aine ei katkaise yhteyttä antigeeniin, vaan aiheuttaa spesifisten signaalien lähettämisen "vahvistumisen". Biologisesti tämä tarkoittaa sitä, että muut vasta-aineet, jotka sijaitsevat solun toisessa osassa, alkavat siirtyä alueelle, josta varoitussignaali tulee, ja muodostavat myös yhteyden keskenään ja siepatun antigeenin. Loppujen lopuksi antigeeni näyttää olevan ympäröitynä kaikilta puolilta ja kiinnittyneenä tiukasti.Sellaista antigeeni + vasta-ainekompleksia kutsutaan immuunikomplekseksi. Tästä hetkestä lähtien antigeenin käyttö alkaa. Mutta nyt emme ole kiinnostuneita antigeenin neutralointiprosessin yksityiskohdista..

Vasta-aineiden tyypit (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Vasta-aineet ovat proteiinirakenteita, joilla on vastaavasti kemiallinen nimi, jota käytetään synonyyminä sanalle vasta-aineet. Joten, vasta-aineet = immunoglobuliinit.

On 5 tyyppiä immunoglobuliineja (Ig), jotka sitoutuvat erityyppisiin antigeeneihin ihmiskehon eri paikoissa (esimerkiksi iholla, limakalvoilla, veressä jne.). Toisin sanoen vasta-aineilla on työnjako. Näitä immunoglobuliineja kutsutaan latinalaisen aakkosten kirjaimiksi - A, M, G, D, E ja ne merkitään seuraavasti: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Diagnoosissa käytetään vain yhtä vasta-ainetyyppiä, joka on spesifisin määritettävän mikrobin suhteen. Toisin sanoen tämäntyyppisen vasta-aineen sitoutuminen havaittuun antigeeniin tapahtuu aina. Yleisimmin käytettyjä ovat IgG ja IgM.

Tämän immuunivasteen periaate (määritellyn biologisen kohteen tunnistamisen ainutlaatuinen tarkkuus ja spesifisyys) on entsyymin immunomäärityksen taustalla. Koska vasta-aineet ovat tarkkoja antigeenien tunnistamisessa, myös koko entsyymin immunomäärityksen tarkkuus on suurin..

Entsymaattinen reaktio

Mikä on entsymaattinen reaktio? Mikä on affiniteetti, substraatti ja reaktiotuote?
Jatkamme entsymaattisen reaktion tarkastelua entsyymi-immunomääritysmenetelmässä.

Mikä on entsymaattinen reaktio?

Entsymaattinen reaktio on kemiallinen reaktio, jossa yksi aine muuttuu toiseksi entsyymin vaikutuksella. Aine, johon entsyymi vaikuttaa, kutsutaan substraatiksi. Ja ainetta, joka saadaan entsyymin vaikutuksesta, kutsutaan reaktiotuotteeksi. Lisäksi entsymaattisen reaktion erikoisuus on sellainen, että tietty entsyymi vaikuttaa vain tiettyyn substraattiin. Tätä entsyymin ominaisuutta tunnistaa ”sen” substraatti kutsutaan affiniteettiksi..

Siten kukin entsyymi johtaa vain yhden sille spesifisen reaktion. Biologisessa maailmassa tunnetaan hyvin monia entsyymejä, samoin kuin entsymaattisia reaktioita. Entsyymimmuunimäärityksessä käytetään vain muutamia entsymaattisia reaktioita - enintään 10. Samaan aikaan valittiin entsymaattiset reaktiot, joiden tuote on värillisiä aineita. Miksi entsymaattisten reaktioiden tuotteet tulisi värjätä? Koska aineen pitoisuuden laskemiseksi värillisestä liuoksesta on olemassa yksinkertainen kemiallinen menetelmä - kolorimetria.

Kolorimetrinen menetelmä - olemus ja periaate

Kolorimetrialla mitataan liuoksen väritiheys, ja aineen konsentraatio lasketaan väritiheydestä. Erityinen laite, kolorimetri, mittaa liuoksen väritiheyden. Kolorimetriassa on mahdollista suorittaa kaksi varianttia väritiheyden riippuvuudesta aineen pitoisuudesta - tämä on suoraan verrannollinen riippuvuus tai käänteisesti verrannollinen riippuvuus. Suoraan verrannollisella riippuvuudella, mitä suurempi aineen konsentraatio, sitä voimakkaampi liuoksen väri tiheys. Kun käänteinen verrannollisuus, sitä korkeampi aineen konsentraatio on, sitä matalampi on liuoksen värin tiheys. Teknisesti tämä tapahtuu seuraavasti: useita ratkaisuja otetaan aineen tunnetulla pitoisuudella, mitataan näiden liuosten tiheys, rakennetaan pitoisuuden kuvaaja värin tiheydestä (kalibrointikaavio).

Seuraavaksi määritetään liuoksen väritiheys, jonka konsentraatio määritetään, ja liuen mitatun väritiheyden tasoa vastaava konsentraatiokaavio saadaan kalibrointikaaviosta. Nykyaikaisissa automaattisissa kolorimetrissä kalibrointi suoritetaan vain kerran, sitten laite itse rakentaa kalibrointikäyrän, joka jää laitteen muistiin, ja mittaus tapahtuu automaattisesti.

Entsyymi-immunomäärityksessä käytetään eniten entsyymejä: peroksidaasi, alkalinen fosfataasi, avidin.

Kuinka immunologiset ja entsymaattiset reaktiot yhdistetään entsyymi-immunomääritykseen? Nyt jatkamme itse entsyymiin kytketyn immunosorbenttimäärityksen tutkimista. Mitä vaiheita se sisältää ja mitä tapahtuu näiden reaktioiden aikana? Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys on suora ja epäsuora.

Entsyymiin kytketty immunosorbentti-määritys - vaiheet

Suoraan entsyymisidottuun immunosorbenttimääritykseen käytetään vasta-aineita havaittavaan antigeeniin, joka on kytketty tiettyyn leimoon. Tämä spesifinen leima on entsymaattisen reaktion substraatti..

Antigeenien kiinnittyminen reiän pintaan ja antigeenin yhdistäminen vasta-aineeseen

Kuinka suora entsyymi-immunomääritys suoritetaan? Biologinen aine otetaan (veri, raaputukset limakalvoista, rasvat) ja asetetaan erityisiin reikiin. Biologista materiaalia jätetään kaivoihin 15-30 minuutiksi, jotta antigeenit voivat tarttua kaivojen pintaan. Seuraavaksi näihin kuoppiin lisätään havaittavissa olevan antigeenin vasta-aineita. Tämä tarkoittaa, että kun havaitaan antigeenejä, esimerkiksi syfilisä, lisätään vasta-aineita syfilisantigeenejä vastaan. Nämä vasta-aineet saadaan teollisesti, ja laboratoriot ostavat valmiita sarjoja. Tätä testimateriaalin ja vasta-aineiden seosta jätetään jonkin aikaa (30 minuutista 4-5 tuntiin), jotta vasta-aineet voivat löytää "oman" antigeeninsä ja ottaa yhteyttä niihin. näyte antigeenejä, sitä enemmän vasta-aineita ottaa heihin yhteyttä.

"Ylimääräisten" vasta-aineiden poisto

Kuten on osoitettu, vasta-aineet liittyvät myös tiettyyn leimaan. Koska vasta-aineita lisätään ylimäärin, kaikki eivät sitoutu antigeeneihin, ja jos näytteessä ei ole antigeeniä, vastaavasti mikään vasta-aine ei sitoudu haluttuun antigeeniin. "Ylimääräisten" vasta-aineiden poistamiseksi kaivojen sisältö kaadetaan yksinkertaisesti. Tämän seurauksena kaikki "ylimääräiset" vasta-aineet poistuvat ja antigeeneihin sitoutuvat jäävät, koska antigeenit "liimataan" kaivojen pintaan. Kuopat huuhdellaan useita kertoja erityisellä liuoksella, jonka avulla voit pestä kaikki "ylimääräiset" vasta-aineet.

Entsymaattinen reaktio - värillisen yhdisteen muodostuminen

Seuraavaksi toinen vaihe alkaa - entsymaattinen reaktio. Entsyymiliuos lisätään pestyihin kuoppiin ja jätetään 30-60 minuutiksi. Tällä entsyymillä on affiniteetti aineeseen (spesifinen leima), johon vasta-aineet ovat sitoutuneet. Entsyymi johtaa reaktion, jonka seurauksena tämä erityinen merkki (substraatti) muuttuu värilliseksi aineeksi (tuotteeksi). Sitten tämän värillisen aineen pitoisuus määritetään kolorimetrisesti. Koska tämä spesifinen leima liittyy vasta-aineisiin, värillisen reaktiotuotteen konsentraatio on yhtä suuri kuin vasta-aineiden konsentraatio. Ja vasta-aineiden pitoisuus on yhtä suuri kuin antigeenien pitoisuus. Siksi analyysin tuloksena saamme vastauksen, mikä on havaitun mikrobin tai hormonin pitoisuus.

Näin tapahtuu suora entsyymi-immunomääritys. Epäsuoraa entsyymisidottua immunosorbenttimääritystä käytetään kuitenkin nykyään useammin, koska epäsuoran herkkyys ja tarkkuus on suurempi kuin suora. Joten siirrymme eteenpäin epäsuoraan entsyymisidottuun immunosorbenttimääritykseen.

Epäsuora entsyymimääritys - vaiheen vaiheet

Epäsuoralla entsyymimäärityksellä on kaksi vaihetta. Ensimmäisen vaiheen aikana käytetään leimaamattomia vasta-aineita havaittavissa oleville antigeeneille, ja toisessa vaiheessa käytetään leimattuja vasta-aineita ensimmäisiin leimaamattomiin vasta-aineisiin. Eli osoittautuu, ettei vasta-aineen suora sitoutuminen antigeeniin, vaan kaksinkertainen kontrolli: vasta-aineiden sitoutuminen antigeeniin, minkä jälkeen toisen vasta-aineen sitoutuminen vasta-aineen + antigeenikompleksiin. Ensimmäisen vaiheen vasta-aineet ovat pääsääntöisesti hiiren ja toisen vuohet.

Antigeenien kiinnitys kuopan pinnalla ja antigeenin sitoutuminen leimaamattomaan vasta-aineeseen
Suoran entsyymimmuunimäärityksen lisäksi suoritetaan näytteenotto biologisesta materiaalista - verestä, roiskeista, määrityksistä. Tutkittu biologinen materiaali viedään kaivoihin ja jätetään 15 - 30 minuutiksi antigeenien kiinnittymiseksi kaivojen pintaan. Sitten merkitsemättömät vasta-aineet antigeeneille lisätään kuoppiin ja jätetään tietyn ajanjakson ajaksi (1-5 tunniksi), jotta vasta-aineet sitoutuvat “heidän” antigeeneihinsä ja muodostavat immuunikompleksin (ensimmäinen vaihe). Poista sitten "ylimääräiset" sitoutumattomat vasta-aineet kaatamalla reikien sisältö. Huuhtele erityisellä liuoksella kaikkien sitoutumattomien vasta-aineiden poistamiseksi kokonaan.

Leimattujen vasta-aineiden sitoutuminen kompleksiseen antigeeniin + leimaamattomaan vasta-aineeseen
Sitten he ottavat toiset vasta-aineet - leimatut, lisätään kuoppiin ja jätetään jälleen jonkin aikaa - 15-30 minuutiksi (toinen vaihe). Tänä aikana leimatut vasta-aineet sitoutuvat ensimmäiseen - leimaamattomaan ja muodostavat kompleksin - vasta-aineen + vasta-aineen + antigeenin. Kuitenkin, sekä leimattuja että leimaamattomia vasta-aineita lisätään kuoppiin ylimäärin. Siksi on jälleen tarpeen poistaa "ylimääräiset", jo leimatut vasta-aineet, jotka eivät sitoutuneet leimaamattomiin vasta-aineisiin. Toista tämä toistamalla reiien sisältö kaatamalla ja pesemällä erityisellä liuoksella.

Entsymaattinen reaktio - värillisen yhdisteen muodostuminen
Sen jälkeen lisätään entsyymi, joka suorittaa reaktion, jossa "merkki" muuttuu värilliseksi aineeksi. Värjäys kehittyy 5–30 minuutissa. Sitten suoritetaan kolorimetria ja lasketaan värillisen aineen konsentraatio. Koska värillisen aineen konsentraatio on yhtä suuri kuin leimattujen vasta-aineiden konsentraatio, ja leimatun konsentraatio on yhtä suuri kuin leimaamattomien vasta-aineiden konsentraatio, joka puolestaan ​​on yhtä suuri kuin antigeenin konsentraatio. Siten saamme havaittavissa olevan antigeenin pitoisuuden.
Tällainen kaksoiskontrolli kahden tyyppisten vasta-aineiden käytön muodossa mahdollisti entsyymiin sidotun immunosorbenttimäärityksen herkkyyden ja spesifisyyden lisäämisen. Analyysiajan pidentämisestä ja lisävaiheiden sisällyttämisestä huolimatta nämä häviöt kompensoidaan tuloksen tarkkuudella. Siksi tällä hetkellä valtaosa entsyymi-immunomääritysmenetelmistä on epäsuora entsyymimmuunimääritys.


Mitä sairauksia havaitaan entsyymi-immunomäärityksellä?

Jatkamme harkintaa, mitkä sairaudet ja mitkä biologisesti aktiiviset aineet havaitaan entsyymisidoksisella immunosorbenttimäärityksellä. Entsyymi-immunomäärityksellä havaitut aineet on esitetty taulukossa.

Julkaisuja Sydämen Rytmin

Verenkiertoelimistön aivojen aineelliset muutokset

Ihmisen pään verenkierto on erityinen fysiologinen mekanismi. Tämän mekanismin toiminnot on tarkoitettu tukemaan ja normalisoimaan aivojen verenkiertoa tilanteissa, joissa systeeminen verenvirtaus muuttuu jostain syystä.

Kuinka selvittää mikä on allerginen? Mikä analyysi välitetään allergialle? Allergia Prik-testi

WHO: n arvioiden mukaan joissain maissa jopa 40% väestöstä kärsii allergioista. Euroopan allergologian ja kliinisen immunologian akatemian asiantuntijat ovat arvioineet, että Euroopassa on noin 150 miljoonaa kroonista allergiaa kärsivää eli 20% väestöstä.