Mikä on verikoe ELISA: lle

Nykyaikaisen lääketieteen kehitys diagnostiikan maailmassa ei lakkaa hämmästyttämästä saavutuksistaan, ja nyt lääkärin ei tarvitse tehdä oletuksia todennäköisestä diagnoosista luottaen vain epäsuoriin oireisiin. Entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen (ELISA) luominen ja käyttöönotto laboratoriotutkimusten avulla antaa sinun nopeasti ja tarkasti määrittää paitsi patogeenin läsnäolon lisäksi myös monet muut taudin ominaisuudet.

IFA: n perustamisen ja kehittämisen historia

Tätä verikokeen testausmenetelmää aloitettiin käytännössä lääketieteessä viime vuosisadan puolivälissä - jossain 60-luvulla. Sen lähtökohtana oli tieteellinen tutkimus histologian alalla, joka rajoittui biologisten lajien soluantigeenisen rakenteen etsimiseen ja tutkimukseen. ELISA-verikoe perustuu sukulaisten antigeenien (AH) ja spesifisten vasta-aineiden (AT) vuorovaikutukseen entsyymin määrittelemän antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostuessa.

Tällainen ilmiö sai tutkijat päättämään, että menetelmää voidaan käyttää tunnistamaan veren seerumissa muodostuneita erityyppisiä proteiiniyhdisteitä, kun patogeeni saapuu kehoon. Koska näitä yhdisteitä on suoraan mukana immuunijärjestelmän toiminnassa, näitä yhdisteitä kutsutaan immunoglobulineiksi (IG, Ig), ja löytö oli suurin läpimurto laboratoriodiagnostiikassa..

Samaan aikaan he alkoivat aktiivisesti käyttää tätä erittäin herkkää menetelmää vasta 80-luvulla, ja se oli saatavana vain hyvin erikoistuneissa lääketieteellisissä laitoksissa. Ensimmäiset, jotka saivat mahdollisuuden käyttää entsyymi-immunomääritysanalysaattoreita, olivat asemat ja verensiirtokeskukset, venereologiset ja tarttuvat lääketieteelliset laitokset. Tämä johtui "XX vuosisadan ruton" - aidsin nopeasta leviämisestä, ja diagnostisten ja terapeuttisten toimenpiteiden kiireellinen käyttöönotto oli tarpeen..

Menetelmäominaisuudet

ELISA-verikokeen laajuus on melko laaja - tällä hetkellä on mahdotonta kuvitella, kuinka monimutkainen monien sairauksien syiden etsiminen olisi. Tällaista tutkimusta sovelletaan nyt melkein kaikilla lääketieteen aloilla, jopa onkologiassa. Vaikka tietämättömien on vaikea ymmärtää, joissakin tapauksissa sen suoritettuaan oli mahdollista pelastaa potilaiden henki havaitsemalla kasvain varhaisvaiheissa.

Nykyaikaisissa diagnostisissa keskuksissa laboratoriotutkimukset eivät ole vain tuumorimarkkereiden esittämiä - ne on varustettu vaikuttavalla paneelien arsenaalilla tätä diagnoosia varten. Niiden avulla voit tunnistaa monia patologisia tiloja, kuten hormonaalisia poikkeavuuksia ja eri alkuperää olevia tarttuvia prosesseja..

Lisäksi ELISA-verikokeen suorittaminen ja dekoodaus mahdollistavat lääkkeiden vaikutuksen seuraamisen sairaan ja jopa eläimen kehoon. Jälkimmäistä käytetään laajalti eläinlääketieteellisillä klinikoilla, sillä se auttaa ylläpitämään lemmikkiemme tai ruuan tarjoajien terveyttä ja varmistaa vakaan lihan, maitotuotteiden ja korvaamattomien munien tarjonnan ruokavaliossa.

Joten vain muutaman millilitran laskimoveren keräämisen ja ELISA-diagnoosin perusteella lääkäri, joka on kuvannut tutkimusaineistot, pystyy määrittämään:

  • hormonaalinen tila, mukaan lukien sukupuolielinten ja kilpirauhanen sekä lisämunuaisen biologisesti aktiiviset aineet;
  • bakteeri- ja virusinfektioiden (hepatiitti B ja C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkuloosi, myko- ja ureaplasmoosi, HIV, TORCH) ja muiden tämän tyyppisten sairauksien esiintyminen;
  • patologisen prosessin patogeenien elintärkeän toiminnan merkit, jotka huipentuivat toipumiseen ja siirtyivät vasta-aineiden muodostumisen vaiheeseen (immuunivaste).

Immuunisolut tunnistavat sellaiset kompleksit paljon helpommin. Vasta-aineiden muodossa olevat jäännösvaikutukset pidetään monissa tapauksissa veressä koko elämän ajan, mikä vähentää käytännössä uudelleeninfektioriskin nollaan..

Immunoglobuliinityypit

Vasta-aineita on useita tyyppejä, joista kukin on mukana immuunivasteen prosessissa tietyssä vaiheessa. Esimerkiksi luokan M immunoglobuliinit (IgM) ovat ensimmäiset, jotka vastaavat AH: n pääsyyn kehoon. Niiden korkeimmat määrät havaitaan taudin alkuaikoina.

Sitten immuunijärjestelmä käynnistää luokan G IG (IgG) plasmaan, joka vastaa antigeenien täydellisestä tuhoamisesta ja potilaan toipumisesta. Myöhemmin ne ovat edelleen veressä, valmistaen siten immuunijärjestelmää toistuvalle altistumiselle identtiselle patogeenille. Tämän periaatteen mukaan rokotus toimii. Kun patologisten mikro-organismien heikennettyjä antigeenejä tuodaan esiin, paljon immunoglobuliineja ilmestyy ja ne kiertävät plasmassa.

Ja myöhemmin, jos patogeeninen kontakti tapahtuu, he selviävät nopeasti tartunnasta ja pelastavat kehon terveysuhkilta. Suuria määriä IgA: ta on keskittynyt limakalvoihin, mikä estää patogeenisten virusten ja bakteerien pääsyn kehoon. IgE: t ovat vastuussa loistartuntojen tappamisesta, ja immuunivasteeseen liittyy monia muita immunoglobuliineja..

Tärkeimmät kiinnostavat kohteet laboratoriodiagnostiikassa ovat Ig-luokat M, G ja A. Pitoisuutensa mukaan voit määrittää taudin vaiheen ja selvittää, mitä tartuntatauteja henkilöllä on ollut elämässään. Voit esimerkiksi tarkistaa vesirokko- tai vihurirokkohistoriaa. Lääkärin ei tarvitse määrätä useita laboratoriotutkimuksia, jotta voidaan selvittää, onko potilaan kehossa tietynlainen AT- tai AH-tyyppi vai jonkin hormonin pitoisuus, vaan riittää, että kirjoitetaan lähetys ELISA-testiä varten..

Metodologian ydin

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys loisille ja muille kehon terveydelle haitallisille mikro-organismeille mahdollistaa patogeenien läsnäolon havaitsemisen ja kertoo myös niiden runsaudesta potilaan veriplasmassa. Siksi tällainen tutkimus mahdollistaa seerumin materiaalista löytyvien patogeenisten mikro-organismien sekä kvalitatiivisen että kvantitatiivisen analyysin..

Patogeenin pitoisuusaste vaikuttaa merkittävästi infektion kehittymiseen ja toipumisnopeuteen, joten laadullista arviointia pidetään yhtä tärkeänä kuin kvantitatiivisena. Hän on kaukana viimeisestä roolista lasten ja aikuisten hoidossa. Mutta miten käy ilmi, että IFA onnistuu tunnistamaan niin suuren määrän mikro-organismeja, jotka loistavat ihmisten ja eläinten kehossa, aiheuttavat haittaa ja heikentävät elämänlaatua?

Tutkimusmenetelmä perustuu useisiin vaihtoehtoihin (suora ja epäsuora - kilpailukykyinen ja ei-kilpailullinen) tehtävien suorittamiseksi, joista kukin on tarkoitettu tiettyihin tarkoituksiin. Tämä lähestymistapa mahdollistaa kohdennetun haun ja mahdollisimman lyhyessä ajassa tietyn patologian syyn tunnistamiseen. Eri luokkaryhmien Ig: n havaitsemiseksi käytetään 96-kaivoista levyä (polystyreenipaneeli), ja sorboidut rekombinanttiproteiinit sijaitsevat sen kaivoissa. Ne pelaavat antigeenejä ja ovat alkuvaiheessa kiinteässä vaiheessa.

Tultuaan reikään veriplasman kanssa, antigeenit tai vasta-aineet tunnistavat kohteen sen orientaation yhteydessä ja muodostavat kompleksin (AG - AT). Tämä muodostuminen on kiinnitetty entsymaattisella yhdisteellä (konjugaatti), joka myöhemmin ilmenee reiän muuttuneena värjäyksenä. ELISA suoritetaan erityisillä koejärjestelmillä, jotka on valmistettu erikoistuneissa laboratorioissa ja varustettu täydellä reagenssivalikoimalla.

Tämä analyysi voidaan suorittaa teloilla - aluslevyillä ja lukemisspektrometreillä, mutta ne vaativat käsityötä. Tietysti laboratorioassistentti on useita kertoja helpompaa ja nopeampaa suorittaa kaikki manipulaatiot täysin automatisoiduissa laitteissa. Niitä käytettäessä laboratorion henkilökunta vapautetaan suuresta määrästä yksitoikkoista toimintaa - pesua, hautaamista ja muuta rutiinia, mutta kaikilla lääketieteellisillä laitoksilla ei ole varaa tällaisiin kalliisiin laitteisiin.

Tutkimusmateriaalien tulkinta on yksinomaan laboratoriodiagnostiikan asiantuntijan toimivaltaa - vain hänelle voidaan kertoa tulokset sairauden etenemisen yksityiskohdista ja hienouksista. Tässä tapauksessa lääkärin on välttämättä harkittava mahdollisuutta saada väärät kielteiset tai väärät positiiviset vastaukset.

Materiaalin purku

Laadullisen entsyymisidonnaisen immunosorbenttimäärityksen tuloksen tulisi olla yksiselitteinen johtopäätös - haluttu mikro-organismi löydettiin tässä verinäytteessä tai ei. Kvantitatiivinen analyysi osoittaa pitoisuuden tason, ja se voidaan ilmaista kahdella tavalla - arvo numeroina tai ”+” -merkkien lukumäärä.

Analysoidut indikaattorit

Tutkimusprosessissa perusteellinen tutkimus tärkeimmistä immuunivasteista, jotka osallistuvat immuunivasteeseen, kuten:

  • IgM - tämän luokan havaitseminen tarkoittaa tarttuvan taudin akuutin muodon kehittymistä. Negatiivinen IgM-hakutulos voi olla sekä todiste halutun patogeenin puuttumisesta että taudin siirtymisestä krooniseen kulkuun.
  • IgA - tämän luokan määritelmä ilman IgM: ää useimmissa tapauksissa, merkki tarttuvan taudin kroonisen tai piilevän muodon kehittymisestä.
  • IgM ja IgA (samanaikainen läsnäolo) - molempien lajien positiiviset tulokset osoittavat patologian akuutin muodon huipun.
  • IgG - sen läsnäolo osoittaa taudin muuttumisen krooniseksi muotoksi tai toipumiseksi ja immuniteetin muodostumiseksi määriteltävälle aineelle.

Tietyn luokan IG: n syntyminen ja kertyminen tapahtuu eri ajanjaksoina. Joten esimerkiksi IgM ilmestyy ensin, noin viiden päivän kuluttua patogeenin saapumisesta. IG: t ovat veressä noin 5-6 viikkoa, ja sitten häviävät vähitellen. Tällä hetkellä ne ovat käytettävissä määritykseen ELISA: lla. Noin 3-4 viikkoa sairauden alkamisen jälkeen ilmaantuu IgG, joka myöhemmin voi pysyä useita kuukausia. Mutta analyysissä he eivät aina pysty tunnistamaan.

IgA: ta muodostuu veressä 2–4 viikon ajan, kun taas 20% heistä sisältyy seerumiin ja 80% - limakalvojen salaisuuteen. Nämä immunoglobuliinit häviävät yleensä 2–9 viikon sisällä, mikä osoittaa taudinaiheuttajan tuhoutumisen ja potilaan toipumisen. Jos ELISA osoittaa edelleen IgA: n läsnäoloa, niin se merkitsee prosessin siirtymistä krooniseen muotoon.

Analyysitulosten asetukset

Saaduista tiedoista riippuen ELISA-vastaukset voidaan antaa taulukon muodossa, jossa on täydellinen luettelo kaikista vasta-aineista ja verenpaineesta ja merkintä positiivisesta tai negatiivisesta reaktiosta. Tietyissä tilanteissa näytetään kvantitatiivinen arvo - terävästi positiivinen, positiivinen, heikosti positiivinen tai negatiivinen tulos. Toinen vaihtoehto osoittaa vasta-aineiden määrän tutkitussa verinäytteessä..

Edellä mainittujen arvojen lisäksi ELISA-prosessissa tutkitaan toista kvantitatiivista parametria - AT: n aviditeetti-indeksiä, laskettuna prosentteina. Se osoittaa kuinka kauan tauti kestää - ts. Mitä korkeampi indikaattori, sitä enemmän aikaa patologia kehittyy..

Vaihtoehtoinen ELISA-menetelmä

Entsyymi-immunomääritys on melko tunnettu ja yleinen diagnoosi. Ehkä jotkut eivät ole koskaan kuulleet hänestä, mutta on yksi muunnelma tästä tutkimuksesta, joka tunnetaan vielä vähemmän laajalle ihmisryhmälle ja jossa otetaan ei-verinäyte. Tätä tekniikkaa kutsutaan okkultisen veren ulosteanalyysiin, ja monissa tapauksissa sillä vältetään ylimääräiset heikentävät toimenpiteet, joihin liittyy myös epämiellyttäviä tuntemuksia..

Piilevän veren (hemoglobiinimolekyylien) ELISA-testi mahdollistaa jopa pienen ruuansulatuskanavan verenvuodon havaitsemisen, jonka merkkejä ei löydy potilaan ulosteesta paljain silmin. Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys okkulttisesta verestä ihmisen ulosteessa lyhyessä ajassa voi osoittaa mahahaavan, polypoosin, divertikuloosin, kasvaimet, joihin varhaisissa vaiheissa ei liity tiettyjä oireita.

Tähän päivään mennessä on luotu tuhansia erilaisia ​​entsyymimmuunimääritysjärjestelmiä, jotka tarjoavat kyvyn löytää vasta-aineita ja verenpainetautiota valtavasta luettelosta patologioita. Siksi tätä analyysiä käytetään melkein kaikissa lääketieteen aloissa, kaikissa ikäryhmissä. Ja ehdoton vaarattomuus antaa sinun turvautua siihen raskauden aikana ja heikentyneiden potilaiden diagnosointiin.

Entsyymin immunomääritys indikaattorien erittelyllä

Immuunijärjestelmät ja entsymaattiset reaktiot

Kuten nimestä voi päätellä, IFA-verikoe sisältää useita komponentteja, nimittäin immuuni- ja entsymaattisen reaktion.
Immuunireaktion avulla voit yhdistää soluelementit ja patogeenit, kun taas entsymaattisen reaktion avulla voit visualisoida ja arvioida edellisen reaktion tulosta.

Mieti kutakin reaktiota yksityiskohtaisemmin..

Mitä immuunivasteet ovat??

Immuuni ovat spesifisiä reaktioita, joiden avulla voit sitoutua antigeenin vasta-aineeseen ja luoda immuunikompleksin. Mitä tämä tarkoittaa? Ensinnäkin on välttämätöntä ymmärtää, että minkä tahansa solun pinta sisältää molekyylejä, jotka sisältävät tietoa solusta, joita kutsutaan antigeeneiksi ja jotka on jaettu:

Yksittäisillä antigeeneillä on tietyistä samankaltaisuuksista huolimatta monia eroja. Ne ovat läsnä yhdessä tietyssä organismissa, eivätkä ne toistu koskaan toisissa. Lajiantigeenejä löytyy erityyppisten elävien esineiden organismeista. Joten esimerkiksi apinoilla, hevosilla tai koirilla on omat, toisin kuin mikään antigeeni. Siksi immuunijärjestelmä käyttää tämän tyyppisiä antigeenejä tunnistamaan omia ja vieraita solujaan, mikä tosiasiassa on entsyymin immunomäärityksen perusta.

Kuinka antigeenit tunnistetaan? Kaikki on täällä tarpeeksi selvää. Yksinkertaisesti sanottuna, immuunisolu tarttuu soluun, joka on aiheuttanut sille “epäilyn”, ja vertaa sen antigeeniä kuvauksen mielessä. Jos epäilyttävän solun antigeeni vastaa sitä, immuunisolu "vapauttaa" sen ja jatkaa. Jos kuvaus on erilainen, organismin reaktio uhkaan on yksi - tuhoaminen. Lisäksi "vihollisen" tunnustaminen on tässä tapauksessa lähes 100%.

Sandwich-tyyppinen immunomääritys-immunomääritys

Kuva. 2. Immunomääritys "sandwich" -tyypin kaavamainen esitys. ATP on substraatin vasta-aine, ATd on detektiovasta-aine, AH on antigeeni, M on leima, joka on kovalenttisesti kytketty detektiovasta-aineeseen, P on substraatti, jolle substraatin vasta-aine adsorboituu.

Tässä immunomääritysmuunnelmassa (kuvio 2) käytetään paria vasta-aineita, jotka ovat spesifisiä tutkitun antigeenin spatiaalisesti etäisille epitoopeille..

I. Substraattivasta-aineiden sorptio

96-kuoppaisen immunomäärityslevyn kuopissa 1 - 2 μg: n substraattivasta-aineet sorboidaan kuoppaa kohti 100 μl: ssa fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS). Inkubointi suoritetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja ravistetaan vaakasuoraan tabletin ravistelijaan. Sitoutumattomien antigeenimolekyylien pesu (2-kertainen) suoritetaan fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, joka sisältää 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Lukko

Epäspesifisten sitoutumiskohtien estämiseksi levykuopat täytetään PBST: llä ja inkuboidaan 10 - 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa.

III. Antigeenin inkubaatio

50 μl testiliuosta tai antigeenin vakiolaimennoksia lisätään esiasorboidun vasta-ainelevyn kaivoihin. Antigeenilaimennokset tulisi valmistaa PBST: n perusteella, koska Tween-20 vähentää proteiinimolekyylien epäspesifistä sitoutumista toisiinsa ja tabletin pintaan. Sekä testiliuos että antigeenin standardilaimennokset lisätään pareittain (tai 3 toistoa) käyttämällä kahta (kolme) kaivoa kutakin proteiinilaimennusta kohden. Inkubointi suoritetaan huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan jatkuvasti sekoittaen. Pesu suoritetaan PBST-liuoksella 3 kertaa.

IV. Entsyymimerkitty vasta-aineinkubaatio

100 μl spesifisten vasta-aineiden liuosta, joka on konjugoitu entsyymimerkillä, lisätään levyn kaivoihin. Konjugoitujen vasta-aineiden optimaalinen konsentraatio on yleensä valmistajan ilmoittama (käytetään yleensä konsentraatiota 2 - 4 μg / ml). Inkubointi entsyymimerkkiä sisältävien vasta-aineiden kanssa suoritetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja ravistetaan vaakatasossa olevalla ravistelijalla. Pesu suoritetaan PBST: llä 5-6 kertaa.

V. Entsymaattisen reaktion suorittaminen, jota seuraa värillisen tuotteen esiintyminen

100 μl substraattiliuosta lisätään kuoppiin ja inkuboidaan 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa jatkuvasti sekoittaen..

VI. Pysäytä entsymaattinen reaktio

Ennen optisen tiheyden mittaamista värireaktio pysäytetään käyttämällä 0,5 M H2NIIN4. Inkuboinnin jälkeen lisätään 50 μl 0,5 M rikkihapon liuosta kuoppiin RPD: n työliuoksen kanssa. Sen jälkeen voit heti alkaa mitata optista tiheyttä.

VII. Absorbanssimittaus

Värillisen tuotteen liuoksen optinen tiheys mitataan λ = 490 nm: llä tabletispektrofotometrillä.

painettu versio

Lisätietoja immunoglobulineista

Kaiken kaikkiaan ihmiskeho tuottaa viittä tunnettua vasta-aineluokkaa, jotka on nimetty Ig: ksi (joka tarkoittaa immunoglobuliineja) ja jotka kuuluvat luokkiin A, M, G, E ja D. Ne kaikki ovat erittäin tärkeitä ELISA-tulosten tulkinnassa. Tietysti on paljon enemmän komplekseja, eivätkä kaikki niistä ole vielä avoinna. Mutta erilaisten sairauksien diagnosoinnissa kolme ensimmäistä vasta-ainetyyppiä ovat arvokkaimpia. ELISA-verikokeessa käytetään mahdollisimman paljon tietoa: vasta-aineiden esiintymisen hetki veressä, niiden konsentraation muutos ajasta, katoamisajasta ja spesifisen vasta-aineen tyypistä riippuen.

Joten primaarisen, akuutin tarttuvan prosessin osallistujat ovat luokan M immunoglobuliineja, jotka osoittavat aina akuuttia vaihetta, jopa kun sairaus poistetaan kliinisesti. Tyypillinen esimerkki on akuutin virushepatiitin B tai C. anicteric muoto. Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys hepatiitille osoittaa, että henkilöllä on akuutti hepatiitti, ja oireet, kuten hypochondria, suun kuivuminen, nivelkivut ja muut epäspesifiset oireet ymmärretään helposti.

Useiden viikkojen kuluttua nämä vasta-aineet havaitaan yhä häviävässä konsentraatiossa, mikä tuottaa luokan G immunoglobuliineja. Niitä havaitaan veressä kuukausia tai jopa vuosia, ja ne osoittavat joko toipumisen ja voivat sitten pysyä elinaikana muodostaen vahvan immuniteetin. Tämä osoittaa voimakkaan suojan taudinaiheuttajien antigeenejä vastaan. Joten tämän luokan vasta-aineet tekevät ihmisestä immuuni toistuvista pernaruton ja ruton tapauksista. Mutta joskus nämä vasta-aineet eivät häiritse antigeenien haitallisia vaikutuksia. Tässä tapauksessa voimme puhua kroonisen prosessin aktiivisuuden lisäämisestä.

IgE: n suhteen sillä on sovelluksia erilaisten loistartuntojen ja allergisten tilojen diagnosointiin, ja IgD suorittaa aputoiminnon: entsyymisidottu immunosorbenttimääritys antaa sinun käyttää sitä kattavassa diagnoosissa keuhkoastman ja autoimmuunisairauksien hoidossa. ELISA-analyysin tulkinta on tietysti paljon monimutkaisempaa, ja immunologit voivat kertoa paljon enemmän. Mitkä ovat merkit siitä, että potilas voi mennä itsenäisesti laboratorioon suorittamaan tutkimuksia?

Kuinka ELISA-analyysi tehdään?

Varustetuissa laboratorioissa ja lääketieteellisissä keskuksissa treponemalimääritys entsyymiimmunomäärityksellä voidaan suorittaa useilla menetelmillä, joita kutsutaan suoriksi ja epäsuoteiksi. Näiden reaktioiden perusta on kuitenkin yksi tapa, jonka avulla voit analysoida syfilistä ELISA-menetelmällä. Tämä testi suoritetaan tietyllä tavalla..

Laboratoriolääkärin lääkärillä on erityinen tabletti - paneeli, jossa on reikiä pyöreiden onkaloiden muodossa jopa sata. Konsentroidut syfilisantigeenit valmistetaan myös erityisesti määrityssarjoissa, jotka asetetaan ELISA-levyn kaivoihin. Sen jälkeen kun potilaan veri on otettu aamulla tyhjään vatsaan, seerumi erotetaan verestä ja asetetaan kaivoihin, joissa on antigeenejä. Antigeeni-vasta-aineen sitoutumisreaktio esiintyy kaivoissa.

Sifilis-ELISA perustuu ensimmäisen vaiheen immuuniyhdisteiden sitoutumisreaktioon ja konjugoituu erityisen entsyymimerkinnän kanssa, jota tarvitaan reaktion laadun lukemiseen. Tässä vaiheessa lisätään entsymaattisen peroksidaasin lisäksi kromogeenisiä väriaineita materiaalin värjäämiseksi reaktion lopputuloksesta riippuen.

Tabletin näyttämien värillisten reikien perusteella testi salataan. Eri ELISA-menetelmien sarjoihin liitetään värimaailmataulukoita, jotka määrittävät potilaan seerumin immunoglobuliinien ja vasta-aineiden määrän, määrän yksikkötilavuudessa.

Reaktion tuloksen arvioimiseksi käytetään myös erikoislaitteistoa - spektrofotometriä fotometrian määrittämiseen ja kaivoissa olevan materiaalin tiheyden arviointiin verrattuna kontrollinäytteisiin. Tiheyden perusteella saadaan tulos, joka on selvästi vahvistettu jokaiselle syfilis-aiheuttajalle normien ja patologian rajoissa.

yleistä tietoa

Entsyymisidottua immunosorbenttimääritystä voidaan käyttää hormonien, immunoglobuliinien, immunologisten kompleksien sekä useiden biologisesti aktiivisten aineiden pitoisuuden määrittämiseen. Tällaisen tutkimuksen materiaalina voit lahjoittaa verta, aivo-selkäydinnestettä, lasimaisen elimen sisältöä jne..

Entsyymisidottua immunosorbenttimääritystä on viime aikoina käytetty yhä enemmän monien etujen takia:

  • herkkyys yli 90 prosenttia;
  • säilyttämiseen tarvittavien ainesosien vakaa varastointi;
  • nopea ja helppo diagnosointi;
  • materiaalien vähimmäiskustannukset;
  • automatisoitu prosessi;
  • halpa.

Lisäksi ELISA antaa sinun tunnistaa infektiot, mukaan lukien hepatiitti, varhaisessa vaiheessa. Siksi sitä suositellaan joskus PCR-tutkimusten sijasta sekä raskauden aikana. Se ei kuitenkaan tee ilman haittoja. Tällaisten testien tulokset puhuvat vain kehon vasteesta taudinaiheuttajalle, mutta sitä ei määritetä. Useimmissa tapauksissa suositellaan ELISA: n ja PCR: n yhdistelmää..

IFA-testauksen avulla voit selvittää koko sarjan tulokset. Erityisesti määritetään kilpirauhashormonien normi, kasvainmarkerien läsnäolo ja joukko infektioita. Norma valitaan jokaiselle indikaattorille erikseen. Joten aikuisten kohdalla ELISA: n tulisi normaalisti näyttää TG-arvot 70 IU / ml, T4 välillä 64 - 146 nmol / L, T3 lasketaan määränä 1,8-2,8 nmol / L.

Raskautta suunniteltaessa tällainen testaus voidaan tehdä sukupuolihormonien määrittämiseksi. Erityisesti luteinisoiva. Sen arvot vaihtelevat jakson päivästä riippuen. Erityisesti enimmäisarvo, joka voidaan havaita, on 150 ja vähintään 1 mU / L.

Kun ELISA: ta käytetään sukupuolihormonin määrittämiseen miehillä, luku välillä 0,5 - 10 mU / L on normaali indikaattori. Jos tutkitaan kroonista gonadotropiinia, tulokset vaihtelevat sukupuolen mukaan. Erityisesti aikuisilla miehillä ja naisilla, joilla ei ole raskautta, indikaattorin tulisi olla 5 mU / ml. Jos testit tehdään raskauden aikana, tulokset voivat olla erilaisia, raskauskolmanneksesta riippuen, jopa kymmeniin tuhansiin yksiköihin.

Mikä on klamydia

PCR: ää, kuten ELISA: ta, käytetään laajasti nykyaikaisissa laboratorioissa sukupuolitautien diagnosoinnissa. Samaan aikaan lääkärit suosittelevat usein molempien testien suorittamista. Monet potilaat uskovat, että tämä on ylimääräinen rahanveto, mutta näillä testeillä on vakava ero, vaikka ensi silmäyksellä ne saattavat tuntua samanlaisilta. Psykologisten tutkimusmenetelmien luokitusta voidaan kuitenkin soveltaa jossain määrin.

PCR: n ja ELISA: n tuloksia käytetään usein raskauden aikana, kun on tarpeen sulkea pois klamydiaalinfektio. Usein tällainen positiivinen infektiotulos on vastaus miesten ja naisten kysymykseen "Miksi en voi tulla raskaaksi". Hedelmättömyysriskin lisäksi raskauden aikana esiintyvä klamydia aiheuttaa vauvan tartuntariskin.

Pääongelma tällaisen tartunnan diagnosoinnissa on oireeton kulku. Spesifiset vasta-aineet voidaan kuitenkin havaita kymmenen päivän kuluttua tartunnasta. Jos PCR-testi raskauden aikana osoittaa tällaisten patogeenien esiintymisen tai puuttumisen, ELISA kertoo sinulle, missä vaiheessa prosessi on nyt

Tällainen tutkimus on myös tärkeä hoidon tulosten arvioimiseksi.

Analyysin salauksen purku

Hepatiitin tai muun patogeenin analyysi ELISA-suorituskyvyssä herättää usein kysymyksiä. Erityisesti kuinka salauksen purku suoritetaan. Tällä hetkellä tulokset osoittavat yhden viidestä immunoglobuliinista: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. Juuri ne erottuvat, koska muiden roolia ei ole selvitetty loppuun asti. Tutkimuksessa tärkeimmät ovat luokat A, M ja G.

Immunoglobuliini A on ensisijaisesti vastuussa limakalvojen suojaavista toiminnoista. Heidän läsnäolonsa tulos on negatiivinen, jos tauti tunnistetaan akuutissa muodossaan heti. Sellaisten suojaavien markkereiden esiintyminen tapahtuu yleensä kaksi viikkoa taudin puhkeamisen jälkeen. Joskus positiivinen tulos saavutetaan jopa myöhemmin.

Näiden vasta-aineiden päätehtävä on mikro-organismien havaitseminen ja tuhoaminen. Heidän lukumääränsä vähenee aina, jos tauti laantuu. Yleensä kahdeksan viikon kuluttua taudin alkamisesta positiivinen tulos puuttuu jälleen. Luokan A immunoglobuliinien havaitseminen myöhemmin voi viitata prosessiin, joka virtaa krooniseksi.

Tärkeimmät markkerit, joiden dekoodaaminen auttaa määrittämään patologian akuutin vaiheen, ovat luokkaan M kuuluvat immunoglobuliinit. Voit havaita ne veressä viisi päivää infektion jälkeen. Niiden viivästyminen veressä on noin kuusi viikkoa, minkä jälkeen heidän katoamisensa tapahtuu nopeasti.

Luokan G immunoglobuliinit vastaavat immuunijäämävaikutuksen muodostumisesta. Niitä alkaa havaita veressä noin kuukauden kuluttua tartunnasta. Jatkossa niiden määritelmää venytetään useita kuukausia. Usein voit tarkkailla heitä koko elämäsi. Sellaiset immunoglobuliinit muodostuvat suojareaktiona, joka eliminoi uudelleeninfektion. Esimerkiksi sellaisia ​​immunoglobuliineja muodostuu sellaisen ihmisen veressä, jolla oli lapsuudessa vesirokko ja joka sai vastaavasti immuniteetin elämän loppuun asti. Tietysti on muitakin infektioita, joiden palaaminen on mahdollista. Tässä tapauksessa analyysi havaitsee tämän ryhmän immunoglobuliinien uudelleenkasvun.

Immunoglobuliineja E käytetään havaitsemaan loiset kehossa. Ryhmään D kuuluva immunoglobuliini sijaitsee B-lymfosyyteissä ja sitä esiintyy joissakin määrin terveillä ihmisillä. Noin kymmenen vuoden ikäisinä he saavuttavat maksimiarvonsa. Tällaisen immunoglobuliinin määrä kasvaa raskauden aikana. Lisäksi sen esiintyminen tavallista suurempana määränä voi olla merkki keuhkoastmasta, immuunipuutostilasta.

Salauksen purkaminen

Vasta-aineet, ne ovat myös immunoglobuliineja, jaetaan viiteen luokkaan, mutta niistä määritetään yleensä vain kolme: M, G ja A, jotka kerääntyvät kehoon eri ajanjaksoina tartunnan jälkeen.

Immunoglobuliinit M ilmestyvät ensin, ne ovat IgM. Ne syntyvät 4-5 päivästä tartunnasta ja ovat veressä puolitoista kuukautta, jonka jälkeen ne katoavat. Jos ELISA osoittaa heidän läsnäolonsa, kyse on taudin akuutista jaksosta tai sen pahenemisesta.

Kolmesta neljään viikkoon ilmaantuu IgG, eli luokan G immunoglobuliineja, joita voi olla läsnä useita kuukausia tai jopa vuosia peräkkäin. Jos ELISA tehtiin kahdesti kahden viikon välein ja IgG: n määrä molemmissa näytteissä kasvoi, voidaan puhua tartunnasta tai sen uudelleeninfektiosta.

IgA, eli luokan A vasta-aineet havaitaan infektion pahenemisesta tai kuukauden kuluttua sen esiintymisestä kehossa. Suurin osa niistä kiertää limakalvoissamme ja vain viidesosa veressä. Ne katoavat vasta sen jälkeen, kun kaikki tartunta-aineet on tuhottu, ts. Vähintään kaksi viikkoa tartunnan jälkeen, enintään kahdeksan.

Jos parantamisen jälkeen ELISA-analyysi osoittaa niiden esiintymisen, tauti on siirtynyt krooniseen vaiheeseen.

Salauksen purkamisen yhteydessä on kiinnitettävä huomiota myös muodossa oleviin merkkeihin + ja -. Vain lääkäri voi tehdä täydellisen tuomion, mutta joitain kehon piirteitä voidaan arvioida seuraavien tietojen perusteella:

Vain lääkäri voi tehdä täydellisen tuomion, mutta joitain kehon piirteitä voidaan arvioida seuraavien tietojen perusteella:

  • Infektioiden puutteen osoittamiseksi indikaattoreiden yhdistelmällä, kuten JgM, JgG, JgA, on kaikkialla miinus;
  • JgM ja JgA osoittavat immuniteetin esiintymisen rokotteen tai infektion jälkeen merkillä miinusmerkki ja JgG plusmerkillä (JgG (+));
  • Seuraavat indikaattorit voivat kertoa akuutin infektion esiintymisestä: JgA (- / +), JgG (- / +) ja JgM (+);
  • Kroonisten infektioiden pahenemisvaiheessa lomakkeessa on seuraava merkintä: JgM, JgG ja JgA plussilla kaikkialla;
  • Kroonisissa infektioissa havaitaan seuraava kuva: JgG (+/-), JgM (-) ja JgA (+/-);
  • JgM (-) osoittaa palautumisen.

Usein suoritetaan myös tutkimus, kuten veren seerumin entsyymisidottu immunosorboiva määritys. Sitä tarvitaan kilpirauhashormonien tutkimiseen. Tällaisten hormonien indikaattorit, kuten tyroksiini, vapaa tyroksiini, trijodityroniini, vapaa trijodityroniini ja tyreoglobuliini, ovat tärkeitä.

Lisäksi sellainen tutkimus on hyödyllinen tarttuvien ja autoimmuunisairauksien diagnosoinnissa..

Mikä on ELISA-verikoe ja miksi se on tärkeää diagnoosissa

Mikä on ELISA

Tämä on laboratoriotutkimus, jonka avulla voit määrittää tiettyjen antigeenien (patogeenisten aineiden) vasta-aineiden (proteiiniluonteisen veren suojatekijät) läsnäolon. Vasta-aineiden joukossa immunoglobuliinit, jotka voivat esiintyä immunokomplekseina, ovat ensiarvoisen tärkeitä.

Immunoglobuliinit tuotetaan ihmisen immuniteetin monimutkaisten neurohumoraalisten reaktioiden seurauksena, jotka tapahtuvat vasteena vieraiden antigeenien kulkeutumiselle. Kullekin patogeenityyppityypille tuotetaan spesifisiä vasta-aineita. Ne toimivat sitoutumalla antigeeniin tai patologiseen mikro-organismiin muodostaen monimutkaisen antigeeni-vasta-aineyhdisteen, jota seuraa neutralointi, entsymaattinen hajotus, fagosytoosireaktiot ja erittyminen kehosta.

Huomaa: potilaassa esiintyvän patogeenin tai haitallisen aineen tyyppi määritetään tiettyjen kompleksien läsnä ollessa ELISA-menetelmällä..

Voit oppia ihmisen immuniteetin toiminnan perusperiaatteet katsomalla tätä videokatsausta:

Sandwich-tyyppinen immunomääritys-immunomääritys

Kuva. 2. Immunomääritys "sandwich" -tyypin kaavamainen esitys. ATP on substraatin vasta-aine, ATd on detektiovasta-aine, AH on antigeeni, M on leima, joka on kovalenttisesti kytketty detektiovasta-aineeseen, P on substraatti, jolle substraatin vasta-aine adsorboituu.

Tässä immunomääritysmuunnelmassa (kuvio 2) käytetään paria vasta-aineita, jotka ovat spesifisiä tutkitun antigeenin spatiaalisesti etäisille epitoopeille..

I. Substraattivasta-aineiden sorptio

96-kuoppaisen immunomäärityslevyn kuopissa 1 - 2 μg: n substraattivasta-aineet sorboidaan kuoppaa kohti 100 μl: ssa fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS). Inkubointi suoritetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja ravistetaan vaakasuoraan tabletin ravistelijaan. Sitoutumattomien antigeenimolekyylien pesu (2-kertainen) suoritetaan fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, joka sisältää 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Lukko

Epäspesifisten sitoutumiskohtien estämiseksi levykuopat täytetään PBST: llä ja inkuboidaan 10 - 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa.

III. Antigeenin inkubaatio

50 μl testiliuosta tai antigeenin vakiolaimennoksia lisätään esiasorboidun vasta-ainelevyn kaivoihin. Antigeenilaimennokset tulisi valmistaa PBST: n perusteella, koska Tween-20 vähentää proteiinimolekyylien epäspesifistä sitoutumista toisiinsa ja tabletin pintaan. Sekä testiliuos että antigeenin standardilaimennokset lisätään pareittain (tai 3 toistoa) käyttämällä kahta (kolme) kaivoa kutakin proteiinilaimennusta kohden. Inkubointi suoritetaan huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan jatkuvasti sekoittaen. Pesu suoritetaan PBST-liuoksella 3 kertaa.

IV. Entsyymimerkitty vasta-aineinkubaatio

100 μl spesifisten vasta-aineiden liuosta, joka on konjugoitu entsyymimerkillä, lisätään levyn kaivoihin. Konjugoitujen vasta-aineiden optimaalinen konsentraatio on yleensä valmistajan ilmoittama (käytetään yleensä konsentraatiota 2 - 4 μg / ml). Inkubointi entsyymimerkkiä sisältävien vasta-aineiden kanssa suoritetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja ravistetaan vaakatasossa olevalla ravistelijalla. Pesu suoritetaan PBST: llä 5-6 kertaa.

V. Entsymaattisen reaktion suorittaminen, jota seuraa värillisen tuotteen esiintyminen

100 μl substraattiliuosta lisätään kuoppiin ja inkuboidaan 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa jatkuvasti sekoittaen..

VI. Pysäytä entsymaattinen reaktio

Ennen optisen tiheyden mittaamista värireaktio pysäytetään käyttämällä 0,5 M H2SO4. Inkuboinnin jälkeen lisätään 50 μl 0,5 M rikkihapon liuosta kuoppiin RPD: n työliuoksen kanssa. Sen jälkeen voit heti alkaa mitata optista tiheyttä.

VII. Absorbanssimittaus

Värillisen tuotteen liuoksen optinen tiheys mitataan λ = 490 nm: llä tabletispektrofotometrillä.

painettu versio

Mitä ovat immunoglobuliinit?

Immunoglobuliinien viisi pääluokkaa - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE - on löydetty ja tutkittu. muiden asemaa ei vieläkään täysin ymmärretä, ja se on tieteellisen tutkimuksen vaiheessa.

Huomaa: käytännön lääketieteessä tärkeimmät ovat luokkien A, M ja G immunoglobuliinit. Määrityksen tietosisältö perustuu niiden esiintymisen, maksimiarvon ja katoamisen eri ajanjaksoihin..

Tarkastellaan tätä kysymystä yksityiskohtaisemmin..

Immunoglobuliini A: n (IgA) päätavoite on hengitysteiden, maha-suolikanavan ja virtsajärjestelmien limakalvojen suojaavat toiminnot. Taudin akuutissa puhkeamisessa on mahdotonta tunnistaa niitä. Nämä suojaavat kompleksit ilmestyvät vasta taudin puhkeamisen 2. viikosta, joskus myöhemmin. Suurin osa immunoglobuliini A: sta on keskittynyt limakudoksiin. Noin noin 80%. Jäljellä olevat vasta-aineet kiertävät veressä. Päätehtävä on mikro-organismien neutralointi ja tuhoaminen. Sen jälkeen kun taudin akuutit oireet laantuvat, näiden immunoglobuliinien määrä alkaa vähentyä ja häviää kokonaan jopa 8 viikon ajan sairauden alkamisesta. Jos IgA: ta havaitaan myöhemmin, tämä tarkoittaa kroonista prosessia.

Kehittyvän patologian akuutin vaiheen pää- ja ensimmäiset markkerit ovat luokan M immunoglobuliinit (IgM). Ne löytyvät viiden päivän kuluttua sairauden alkamisesta. Voit selvittää heidän läsnäolonsa veressä noin 6 viikon ajan. Sitten ne alkavat haalistua nopeasti.

Jäännösimmuunivaste luonnehtii luokan G immunoglobuliinien (IgG) läsnäoloa veressä. Näiden tekijöiden esiintyminen veressä havaitaan noin kuukauden kuluttua taudin puhkeamisesta. Tulevaisuudessa ne voidaan määrittää useiksi kuukausiksi, vuosiksi ja jopa eliniäksi suorittamalla suojaava tehtävä taudin palautumiselta (uusiutumiselta) ja tekemällä joissakin tapauksissa patologian toissijainen kehitys mahdottomaksi. Jos immunoglobuliini G: n määrä alkaa nousta uudelleen, voidaan epäillä uudelleeninfektiota. Samanlainen johtopäätös voidaan tehdä tekemällä kaksi tai kolme näytettä, jotka on otettu kahden viikon välein.

Immunoglobuliini E: tä (IgE) käytetään parasitologian käytännössä.

Immunoglobuliini D (IgD) sijaitsee B-lymfosyyteissä, sitä on pieni pitoisuus terveillä ihmisillä. 10 vuoden elämän jälkeen saavuttaa maksimiarvonsa. Immunoglobuliini D määrä lisääntyy raskauden aikana potilailla, joilla on sidekudoksen systeemiset sairaudet, keuhkoastma, immuunikatoviruksen aiheuttamat sairaudet.

Vasta

Entsyymi-immunomäärityksen suorittamisessa ei ole kardinaalisia vasta-aiheita. Joskus raskauden aikana, kun potilaalla on jatkuvia muutoksia veren hormoneissa, voi olla tarpeen suorittaa toistuva analyysi luotettavamman tuloksen saamiseksi. Diagnostista menetelmää ei suositella seuraavan jälkeen:

  • kirurgiset toimenpiteet;
  • hemolyysi (punasolujen tuhoaminen);
  • verensiirto;
  • punktion tai biologisen materiaalin biopsian ottaminen.

Indikaatiot entsyymimäärityksen määrittämiseksi

Patogeenisten mikrobien esiintymiseen kehossa vasta-aineiden määrittäminen:

  • kuppa;
  • trichomoniasis;
  • ureaplasmoosi ja mykoplasmoosi.

Immunoglobuliinien ja helmintiahyökkäysten lukumäärä on lisääntynyt.

Diagnostiikka suoritetaan seuraavien havaitsemiseksi:

  • herpeettiset sairaudet;
  • ryhmät virushepatiitti;
  • Epstein-Barr-virus;
  • sytomegalovirus.

ELISA: n avulla on mahdollista määrittää vasta-aineiden esiintyminen 600 allergeenityypille, havaita immuunikatoisuuden tila, suorittaa kattava tutkimus ennen elinsiirtoleikkausta, suorittaa kattava analyysi hoidon tehokkuudelle.

ELISA on lisämenetelmä syöpäsolujen havaitsemiseksi..

koulutus

Tämän tyyppisen verikokeen periaate perustuu spesifisten vasta-aineiden muodostumiseen ihmiskehossa antigeenien saapuessa siihen, toisin sanoen vieraiden aineiden, jotka aiheuttavat sairauden kehittymisen. Niiden vuorovaikutuksen tuloksena muodostuu antigeeni-vasta-ainekomplekseja, joita tutkitaan entsyymin immunomäärityksen aikana.

Tältä osin verikoe ja muu biologinen ELISA-testi ELISA-testiä varten vaativat jonkin verran valmisteita, jotta nämä eivät vaikuta näihin komplekseihin ja vastaavasti tulosten luotettavuuteen..

Veri luovutetaan tyhjään vatsaan, myös 14 päivää ennen ehdotettua tutkimusta, spesifinen hoito lopetetaan ja antibakteeristen, viruslääkkeiden käyttö lopetetaan.

ELISA-veri lahjoittaa laskimosta. Suoraan ennen verinäytteitä fyysistä aktiivisuutta tulisi rajoittaa, samoin kuin tupakointi ja alkoholin käyttö tulisi sulkea pois..

Kuinka veren ELISA on


Useimmissa tapauksissa potilaiden verta käytetään entsyymimääritykseen, joskus otetaan lasimaista kudosta, aivo-selkäydinnestettä, amnioottista nestettä.

Veri otetaan injektioneulan kautta ruiskuun ulnaarisuonesta. Tutkimus suoritetaan tyhjään vatsaan. On muistettava, että tiettyjen lääkkeiden käyttö voi vaikuttaa analyysin tulokseen. Ennen verenluovutusta on pidättäydyttävä tupakoinnista ja alkoholin käytöstä. Huumausaineiden käyttö voi vääristää tuloksia..

IgM: n, IgG: n, IgA: n immunoglobuliinien negatiivisten arvojen tapauksessa voidaan puhua taudin puuttumisesta tai sen alkuvaiheesta, ja miinusten tulos on mahdollinen täydellisessä toipumisessa merkittävän ajan kuluttua..

Jos IgA: ta ja IgM: ää ei löydy ja IgG on positiivinen, puhutaan kaiken todennäköisyyden muodostuneesta immuniteetista tartuntataudin tai rokotuksen jälkeen.


Jos korkean IgM-tiitterin kanssa on negatiivisia IgG: n, IgA-arvoja, voidaan päätellä, että on olemassa akuutti infektio.

Immunoglobuliinien tulosten samanaikaiset positiiviset arvot - IgA, IgM, IgG ovat ominaisia ​​olemassa olevan kroonisen sairauden akuutin uusiutumisen vaiheelle.

Kroonisen infektion, joka on prosessissa remissio (remissio) vaiheessa, ELISA osoittaa immunoglobuliini M (IgM) negatiivisia arvoja, kun taas immunoglobuliinien G (IgG) ja A (IgA) tulos on positiivinen.

Reagenssisarjat

Eri valmistajat tuottavat entsyymisidottuja immunosorbenttimäärityssarjoja monenlaisissa kokoonpanoissa. Venäjällä se tunnustetaan. Tämä valmistaja tuottaa reagenssipakkauksia ELISA-tutkimuksiin melkein kaikista leveysasteillamme yleisistä infektioista, jotka voidaan analysoida tällä tavalla. Itse reagenssien lisäksi sarjoihin sisältyy lisämateriaaleja, mikä varmistaa turvallisuuden, mukavuuden ja nopeuden analyysissä. Lisäksi kemialliset aineet on maalattu eri väreillä, mikä vähentää virheen todennäköisyyttä reagenssin laboratorioassistentin valinnassa.

Kemiallis-biologiset sarjat eroavat toisistaan ​​suhteellisen saatavuuden suhteen, mikä vaikuttaa suoraan entsyymi-immunomäärityksen jakautumiseen ja saatavuuteen väestölle.

Entsyymi-immunomääritysmenetelmän edut

ELISA-menetelmän tärkeimmät edut ovat:

  • alhaisten kustannusten analyysi;
  • diagnostinen spesifisyys, tarkkuus;
  • dynaaminen hallinta (toista analyysi hoidon tehokkuuden ja sairauden vaiheiden määrittämiseksi);
  • mahdollisuus suorittaa joukkoseulonta tartunnan fokusissa;
  • tuloksen saamisen nopeus;
  • analyysin suhteellinen helppous;
  • mahdollisuus käyttää tietotekniikkaa prosessoinnissa;
  • turvallisuus ja kivuton potilaalle.

Kun nimitetään

ELISA-menetelmää pidetään yhtenä tarkimmista diagnoosimenetelmistä, sen luotettavuus on yli 90%. Analyysiä käytetään tunnistamaan useita vakavia sairauksia ja vaarallisia tiloja..

Mitkä patologiat voidaan tunnistaa:

  • virushepatiitti;
  • HIV
  • sytomegalovirusinfektio;
  • herpeettiset patologiat;
  • mononukleoosi;
  • toksoplasmoosi;
  • vihurirokko, tuhkarokko;
  • tietyntyyppiset loiset;
  • Helicobacter pylorin aiheuttamat patologiat;
  • onkologiset sairaudet;
  • allergiset reaktiot;
  • hormonaaliset häiriöt;
  • lisääntymisjärjestelmän ongelmat;
  • autoimmuunisairaudet;
  • kehityshäiriöt, sikiön epämuodostumat.

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys raskauden aikana antaa sinun arvioida tiettyjen munuaisten, sydämen ja verisuonien patologioiden kehittymisriski..

Diagnoosina on seurata vasta-aineiden tasoa, jotka voivat aiheuttaa lapsessa vakavia neurologisia häiriöitä..

Entsyymi-immunomääritys parasitologiassa


Mahdollisuus käyttää ELISA: ta loistautien diagnosoinnissa määritetään spesifisellä immunoglobuliinilla E (IgE), jolla on taipumus kasvaa tässä erityisessä sairausryhmässä. Lisäksi immunoglobuliini E on merkki allergisiin prosesseihin liittyvistä atooppisista reaktioista. Veressä sitä löytyy pieninä määrinä. Sen pääpaikka on limakalvot, basofiilit ja markofagi. Tämän proteiinikompleksin päätehtävänä on suojata kehon limakalvoja. Mutta samalla hän osallistuu loisiin kohdistuviin immuunivasteisiin. Eosinofiilien ja makrofagien aktivaatio on vastuussa IgE: n aktivaatiosta. Tämä on tärkeä tosiasia vertaamalla analyysitietoja sairauden diagnosoinnissa..

ELISA: ta käytetään havaitsemaan:

  • pyöreät helmintit (pyörömato, pinworms);
  • akuutit ja krooniset opisthorchiasis-muodot;
  • trikinoosi;
  • giardian läsnäolo (lisäanalyysinä);
  • leishmaniaasin muodot;
  • ameebatauti;
  • toksoplasman sisältö;

Tärkeää: immunoglobuliinit tuotetaan kehossa vasta-aineina spesifisille antigeeneille. Tästä syystä tarkkuusvirheitä ei voida sulkea pois, vaikka analyysissä olisi korkein spesifisyys. Loistaudit, todennäköisyysprosentti on noin 90%.

Yhteenvetona on huomattava, että nykyaikainen immunologia on jatkuvasti kehitteillä, etsitään uusia diagnoosimenetelmiä ja sairauksien hoitoa.

Stepanenko Vladimir, kirurgi

67, yhteensä tänään

(54 ääntä, keskimäärin: 4,17 viidestä)

Aiheeseen liittyvät julkaisut
Rasvainen verikoe
Verikoe kreatiniinille: standardit, ote, miten ottaa

Jotain proteiinien suojaavasta roolista ihmiskehossa

Infektion jälkeen ihmisen vasta-aineet muuttavat pitoisuuttaan veressä taudin vaiheesta riippuen. Tarkka vasta-aineiden määrän ja laadun tutkiminen auttaa määrittämään, onko tämä vaihe akuutti vai krooninen, ja kuinka tehokkaasti ruumiin selviytyy vieraasta kasvistoista..

ELISA-analyysi on tehokas hormonaalisten häiriöiden, syövän ja immuunihäiriöiden määrittelyssä. Varhaisessa vaiheessa se voi havaita vakavia sairauksia, kuten hepatiitti B ja syfilis, HIV-tartunnan, samoin kuin useita viruksia, jotka eivät ilmene millään tavalla, esimerkiksi sytomegalovirus.

Hyvät ja huonot puolet

Entsyymisidonnaisella immunosorbenttityyppisellä diagnoosilla on useita etuja verrattuna muihin tutkimusmenetelmiin:

  1. Korkea herkkyys (saavuttaa 90%)
  2. Kohtuullinen hinta diagnoosisarjoille.
  3. Vakaus tallennettaessa kaikkia testin aineosia (yli vuosi);
  4. Kyky havaita infektio ensimmäisessä vaiheessa.
  5. Tutkimuksen mukavuus ja tehokkuus.
  6. Soveltuvuus joukkotutkimuksiin.
  7. tasaisuus.
  8. Mahdollisuus käyttää diagnosoidun materiaalin vähimmäismäärää.
  9. Helppo seurata tarttuvan luonteen patologian dynamiikkaa.
  10. Saavutettavuus (tänään entsyymimmuunimääritystä suoritetaan kaikissa sairaaloissa ja klinikoilla)
  11. Reaktiovaiheiden automatisointi.

Tutkimuksen haittoja ovat muun muassa:

  • Se ei paljasta itse patogeenia, vaan kehon immuunivaste patogeenin tunkeutumiseen.
  • Mahdollisuus saada vääriä positiivisia (vääriä negatiivisia) tuloksia tiettyjen lääkkeiden käytön, teknisten puutteiden, heikentyneen aineenvaihdunnan, useiden kroonisten sairauksien esiintymisen vuoksi.

Menetelmäominaisuudet

ELISA-verikokeen laajuus on melko laaja - tällä hetkellä on mahdotonta kuvitella, kuinka monimutkainen monien sairauksien syiden etsiminen olisi. Tällaista tutkimusta sovelletaan nyt melkein kaikilla lääketieteen aloilla, jopa onkologiassa. Vaikka tietämättömien on vaikea ymmärtää, joissakin tapauksissa sen suoritettuaan oli mahdollista pelastaa potilaiden henki havaitsemalla kasvain varhaisvaiheissa.

Tärkeä! ELISA - verikoe, joka osoittaa tietyille pahanlaatuisille prosesseille ominaisia ​​markkereita ja jonka avulla voit havaita taudin tuolloin, kun siihen ei sovelleta muuta menetelmää.

Nykyaikaisissa diagnostisissa keskuksissa laboratoriotutkimukset eivät ole vain tuumorimarkkereiden esittämiä - ne on varustettu vaikuttavalla paneelien arsenaalilla tätä diagnoosia varten. Niiden avulla voit tunnistaa monia patologisia tiloja, kuten hormonaalisia poikkeavuuksia ja eri alkuperää olevia tarttuvia prosesseja..

Lisäksi ELISA-verikokeen suorittaminen ja dekoodaus mahdollistavat lääkkeiden vaikutuksen seuraamisen sairaan ja jopa eläimen kehoon. Jälkimmäistä käytetään laajalti eläinlääketieteellisillä klinikoilla, sillä se auttaa ylläpitämään lemmikkiemme tai ruuan tarjoajien terveyttä ja varmistaa vakaan lihan, maitotuotteiden ja korvaamattomien munien tarjonnan ruokavaliossa.

Joten vain muutaman millilitran laskimoveren keräämisen ja ELISA-diagnoosin perusteella lääkäri, joka on kuvannut tutkimusaineistot, pystyy määrittämään:

  • hormonaalinen tila, mukaan lukien sukupuolielinten ja kilpirauhanen sekä lisämunuaisen biologisesti aktiiviset aineet;
  • bakteeri- ja virusinfektioiden (hepatiitti B ja C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkuloosi, myko- ja ureaplasmoosi, HIV, TORCH) ja muiden tämän tyyppisten sairauksien esiintyminen;
  • patologisen prosessin patogeenien elintärkeän toiminnan merkit, jotka huipentuivat toipumiseen ja siirtyivät vasta-aineiden muodostumisen vaiheeseen (immuunivaste).

Immuunisolut tunnistavat sellaiset kompleksit paljon helpommin. Vasta-aineiden muodossa olevat jäännösvaikutukset pidetään monissa tapauksissa veressä koko elämän ajan, mikä vähentää käytännössä uudelleeninfektioriskin nollaan..

Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys loisille ja muille kehon terveydelle haitallisille mikro-organismeille mahdollistaa patogeenien läsnäolon havaitsemisen ja kertoo myös niiden runsaudesta potilaan veriplasmassa. Siksi tällainen tutkimus mahdollistaa seerumin materiaalista löytyvien patogeenisten mikro-organismien sekä kvalitatiivisen että kvantitatiivisen analyysin..

Patogeenin pitoisuusaste vaikuttaa merkittävästi infektion kehittymiseen ja toipumisnopeuteen, joten laadullista arviointia pidetään yhtä tärkeänä kuin kvantitatiivisena. Hän on kaukana viimeisestä roolista lasten ja aikuisten hoidossa. Mutta miten käy ilmi, että IFA onnistuu tunnistamaan niin suuren määrän mikro-organismeja, jotka loistavat ihmisten ja eläinten kehossa, aiheuttavat haittaa ja heikentävät elämänlaatua?

Tutkimusmenetelmä perustuu useisiin vaihtoehtoihin (suora ja epäsuora - kilpailukykyinen ja ei-kilpailullinen) tehtävien suorittamiseksi, joista kukin on tarkoitettu tiettyihin tarkoituksiin. Tämä lähestymistapa mahdollistaa kohdennetun haun ja mahdollisimman lyhyessä ajassa tietyn patologian syyn tunnistamiseen..

Tultuaan reikään veriplasman kanssa, antigeenit tai vasta-aineet tunnistavat kohteen sen orientaation yhteydessä ja muodostavat kompleksin (AG - AT). Tämä muodostuminen on kiinnitetty entsymaattisella yhdisteellä (konjugaatti), joka myöhemmin ilmenee reiän muuttuneena värjäyksenä. ELISA suoritetaan erityisillä koejärjestelmillä, jotka on valmistettu erikoistuneissa laboratorioissa ja varustettu täydellä reagenssivalikoimalla.

Tämä analyysi voidaan suorittaa teloilla - aluslevyillä ja lukemisspektrometreillä, mutta ne vaativat käsityötä. Tietysti laboratorioassistentti on useita kertoja helpompaa ja nopeampaa suorittaa kaikki manipulaatiot täysin automatisoiduissa laitteissa. Niitä käytettäessä laboratorion henkilökunta vapautetaan suuresta määrästä yksitoikkoista toimintaa - pesua, hautaamista ja muuta rutiinia, mutta kaikilla lääketieteellisillä laitoksilla ei ole varaa tällaisiin kalliisiin laitteisiin.

Siksi monet sairaalat ja diagnostiikkalaitokset jatkavat IFA: n suorittamista vanhalla tavalla - puoliautomaattisissa koneissa..

Tutkimusmateriaalien tulkinta on yksinomaan laboratoriodiagnostiikan asiantuntijan toimivaltaa - vain hänelle voidaan kertoa tulokset sairauden etenemisen yksityiskohdista ja hienouksista. Tässä tapauksessa lääkärin on välttämättä harkittava mahdollisuutta saada väärät kielteiset tai väärät positiiviset vastaukset.

ELISA-analyysin tulokset perustuvat kemiallisten reaktioiden saamiseen entsyymeille, jotka toimivat erityisinä tunnistusmerkeinä vasta-aineiden tunnistamiseksi. Siksi immunokemiallisten reaktioiden aikana vasta-aineet alkavat olla vuorovaikutuksessa tiettyjen antigeenien kanssa. Kaikki tämä antaa syyn väittää, että väärät tulokset ELISA-verenluovutuksessa ovat minimaaliset.

Tutkimuksen avulla voit määrittää immuunisolujen määrän, niiden ominaisuudet sekä tarvittavien vasta-aineiden läsnäolon

Positiivinen tulos otetaan huomioon, kun liuoksen värjäytyminen havaitaan. Väri osoittaa, että antigeenit ovat vuorovaikutuksessa vasta-aineen kanssa. Jos mitään tällaista ei tapahdu, tulos on negatiivinen.

Entsyymimmuunimäärityksen suorittamiseksi on olemassa useita menetelmiä ja menetelmiä: suora ja epäsuora menetelmä, kilpaileva ja estävä menetelmä.

Verikokeen (minkä tahansa muun biologisen materiaalin) perusta ELISA: lle on algoritmi, joka muodostuu kahden reaktion - immuunijärjestelmän ja entsymaattisen - toteuttamisesta.

Ensimmäisen aikana patologiset aineet sitoutuvat tutkimukseen otettavan biologisen materiaalin solujen suojaelementteihin. Muodostuu immuunikompleksi "antigeeni - vasta-aine". Se näyttää seuraavalta. Antigeenejä on läsnä ehdottomasti kaikkien solujen pinnalla.

YKSITYISKOHDAT: Veren klamydian dekoodaus

Kun vieraat solut saapuvat kehoon, immuunisolut vangitsevat ne (joiden pinnalla vasta-aineet sijaitsevat), jotka vertaavat vasta vastaanotettujen solujen pinnasta peräisin olevia antigeenejä koskevaa tietoa omaan "muistiin" tallennettuun tietoon. Jos nämä tiedot eivät täsmää, mukaan otetaan kehon suojaavat toiminnot, joihin sisältyy immuunikompleksin muodostuminen.

Tämän jälkeen suoritetaan entsymaattinen reaktio, joka visualisoi edellisen reaktion tulokset. Sen periaate perustuu aineen muuntamiseen toisesta toiseen. Jokaiselle ELISA-tyypille, joka muodostaa materiaalin immuunireaktion aikana, on tietty entsyymi, jonka prosessoinnilla määritetään vieraan aineen konsentraatio (liuoksen värjäämisen voimakkuuden perusteella)..

Julkaisuja Sydämen Rytmin

Miksi nenä vuotaa aikuisilla: harvinaisen ja tiheän verenvuodon syyt, kuinka lopettaa ja mitä tehdä seuraavaksi

Tilastotietojen mukaan joka kolmas ihminen maailmassa havaitsee L-pehmeyttä, lisääntynyttä verisuonten läpäisevyyttä.

Onko diabeteksen syöminen mandariineja mahdollista?

Lähes kaikki sitrushedelmät ovat hyviä syödä diabeteksen kanssa. Ne sisältävät pienen määrän hiilihydraatteja ja paljon kuitua, minkä vuoksi niiden käyttö ruuissa ei aiheuta rajuja muutoksia verensokerissa.